ПЦР, по сравнению с любым другим методом анализа, чрезвычайно чувствительная, более быстрая, менее дорогая и нетребовательная к образцам пациентов методика.
Достоверность метода ПЦР
Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR – polymerase chain reaction) – метод получения множества копий определенных фрагментов ДНК (генов) в биологическом образце. В качестве материала для исследований методом полимеразной цепной реакции выступают кровь, моча, слюна, мокрота, ликвор, биоптаты тканей, соскобы со слизистых оболочек. Методы исследования нуклеиновых. При диагностике туберкулёза метод ПЦР применяют в случае получения положительных результатов при проведении плановых аллергических исследований в благополучных по туберкулёзу хозяйствах. Цифровая ПЦР – высокоточный современный метод количественного анализа нуклеиновых кислот. Если вам назначили количественный ПЦР-анализ, врач напишет в направлении не только название исследования, но и предпочтительный метод, которым нужно провести ПЦР-анализ.
История открытия современных методов молекулярной диагностики
ПЦР анализ на инфекции Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет выявить у человека различные инфекционные и наследственные заболевания, как в острой и хронической стадии. В середине 1990-х с помощью метода ПЦР-амплификации ДНК исследовали останки царской семьи Романовых. К неоспоримым преимуществам метода полимеразной цепной реакции относятся следующие аспекты.
История открытия современных методов молекулярной диагностики
Полимеразная цепная реакция была вновь открыта в 1983 г. Мюллисом Kary Mullis. За разработку ПЦР-метода он был удостоен Нобелевской премии в области химии в 1993 г. Открытие метода ПЦР стало одним из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние 30 лет и позволило поднять медицинскую диагностику на качественно новый уровень. За короткое время ПЦР-анализ распространился по всему миру, быстро выйдя из лабораторий научных институтов в сферу практического клинического использования. Этот метод нашел применение в: диагностике инфекционных заболеваний, в том числе вызванных агентами, трудно поддающимися культивированию: в клинической диагностике вирусных и бактериальных инфекций; диагностике наследственных муковисцидоз, фенилкетонурия, гемофилия , онкологических и др. Кроме того, молекулярные методы используются в таких областях, как эпидемиология, фармакология, экология, сельское хозяйство, пищевая промышленность, биотехнология. Изящность, простота исполнения, непревзойденные показатели чувствительности и специфичности принесли новому методу небывалую популярность.
Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа. Групп-специфическая ПЦР англ. Если нуклеотидная последовательность матрицы известна частично или неизвестна вовсе, можно использовать вырожденные праймеры, последовательность которых содержит вырожденные позиции, в которых могут располагаться любые основания. Какие биологические материалы исследуются? Может использоваться при инфекционном поражении мочеполового тракта у мужчин и мочевыделительных органов у женщин у мужчин использование в качестве материала мочи заменяет эпителиальный соскоб. Применяется для диагностики туберкулеза и реже для диагностики респираторных форм хламидиоза и микоплазмоза. Мокроту в количестве 15-20 мл собирают в стерильный одноразовый флакон. Биологические жидкости. Сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, слюна забираются по показаниям. Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек. Обычно используются для диагностики заболеваний, передающихся половым путем ЗППП , таких как гонорея, хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез, герпетическая и другие инфекции, поражающие слизистые оболочки. Чаще всего используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки для выявления хеликобактерной инфекции.
Из-за этого полимеразу приходилось добавлять после каждого цикла, что существенно увеличивало как стоимость реактивов, так и времязатраты экспериментатора. Этот недостаток удалось преодолеть в 1986 году, когда Муллис и его научная группа решили использовать Taq-полимеразу, обладающую термоустойчивостью. Были и другие трудности, но их все удалось преодолеть, и со временем ПЦР-технология заняла почетное место среди других успешно применяющихся технологий. Полимеразная цепная реакция: принцип работы Несмотря на революционное значение, принцип ПЦР основан на довольно базовых свойствах молекулы ДНК. Чтобы понять этот принцип, необходимо вспомнить, как устроена молекула ДНК и как осуществляется ее удвоение в клетке — репликация. ДНК представляет собой длинный полимер, состоящий из нуклеотидов — своего рода букв алфавита, — на котором записана вся генетическая информация о нашем организме. Только разных букв — нуклеотидов — в этом алфавите всего 4: аденин А , тимин Т , гуанин Г и цитозин Ц. Нуклеотиды в составе ДНК образуют две нити, которые комплементарно связаны между собой: нуклеотид А в одной цепи строго соответствует нуклеотиду Т в другой цепи, а Г соответствует Ц Рис. А: Строение молекулы ДНК. Б: Общая схема репликации ДНК в живой клетке. В результате такого кодирования обе цепи ДНК несут одинаковую информацию, хоть и записанную разными буквами. Это имеет особенно важное значение для деления: обе дочерние клетки должны получить идентичную генетическую информацию. Поэтому перед делением клетки происходит репликация — молекула ДНК разделяется на две материнские нити, и на них, как на матрице, комплементарно достраиваются новые дочерние нити ДНК. В результате происходит удвоение генетического материала Рис. При ПЦР для инициации синтеза дочерней цепи используют праймеры — короткие 18-25 пар нуклеотидов, п. ДНК-фрагменты, комплементарные началу материнской цепи. Присоединение праймеров позволяет ДНК-полимеразе сесть на образовавшийся двухцепочечный фрагмент и продолжить синтез до достижения терминирующего триплета или до прекращения поддержания оптимальных для репликации условий.
Эта последовательность всегда уникальна, за исключением некоторых схожих участков ДНК, которые отвечают за однообразие в пределах одного вида. При помощи методики ПЦР можно найти даже мельчайшие фрагменты нуклеиновой кислоты, чтобы определить, к какому виду принадлежит микроорганизм. Однако анализ ДНК небольшого количества микробов достаточно мало информативен, из-за чего требуется увеличить количество нуклеотидов. Именно с этими целями используется ПЦР, позволяющий многократно дублировать цепочку нуклеотидов. Катализатором такого процесса выступают нити РНК, они крепятся к изучаемому гену. В результате всего за несколько часов из одного фрагмента можно получить достаточно биологического материала для изучения. После изобретения метода ПЦР были изучены и зафиксированы уникальные нуклеотидные последовательности праймеры длиной 15-30 штук , характерные только для конкретного патогена. Если поместить такие праймеры в пробирку с исследуемым материалом, в котором есть ДНК или РНК «живых» патогенов, начнется реакция репликации — создание большого количества копий, которые можно визуально идентифицировать. И при расчете результатов сотрудники лаборатории могут определить, присутствуют ли в исследуемом образце определенные бактерии и вирусы, поэтому результаты анализа в основном качественные. Метод ПЦР строго специфичен и при правильном выполнении не может дать ложноположительного результата. То есть, если инфекции нет, анализ никогда не покажет, что она есть. Поэтому очень часто ПЦР-анализ проводится дополнительно для подтверждения диагноза, а также для того, чтобы определить патоген и его природу. Преимущества и недостатки На сегодняшний день ПЦР считается наиболее информативным способом определения возбудителей инфекционных заболеваний. Диагностика с помощью этого метода позволяет найти возбудителя, присутствующего в исследуемых материалах. Это — наиболее точный анализ на половые инфекции, скрытые инфекции и другие заболевания, передающиеся половым путем. Кроме этого, с помощью ПЦР сегодня определяется наличие коронавируса и ряда других инфекционных болезней, которые передаются воздушно-капельным путем. Полимеразная цепная реакция является эффективным диагностическим инструментом, который позволяет врачу не только точно определить тип инфекционного возбудителя в организме пациента, но и выявить количество патогенов.
Достоверность метода ПЦР
Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Главное отличие ПЦР от других методов диагностики – тест-система определяет ДНК вируса. Как проводится ПЦР-диагностика, когда назначают исследование с помощью этого метода и как подготовиться к анализу. Полимеразная цепная реакция или ПЦР — это метод создания множества копий определенного участка ДНК in vitro (в пробирке, а не в организме). Полимеразная цепная реакция: 1-й цикл.
Как проводят анализ методом ПЦР: описание процедуры
Благодаря полимеразной цепной реакции, появилась возможность выявлять инфекции, находящиеся в латентной или хронической форме. ПЦР анализ обнаруживает возбудителя инфекционного процесса на стадии, когда еще нет симптомов. На чем основана диагностика при помощи ИФА Иммуноферментное исследование является, прежде всего, качественным анализом. Но с течением времени и усовершенствованием технологий, благодаря иммуноферментному анализу, стало возможным определять, кроме наличия или отсутствия патологических изменений в организме, вызванных конкретным возбудителем, вдобавок количество инфекционных агентов. Исследование при помощи ИФА применяется еще для выявления разнообразных онкомаркеров и стадий онкологического процесса. А также к иммуноферментному исследованию прибегают для диагностирования заболеваний эндокринной системы и установления уровня гормонов, отвечающих за то или иное заболевание. Иммуноферментный анализ представляет собой одно из интенсивно развивающихся течений синтетической энзимологии. ИФА сформирован на избирательном отклике специфических иммунологических взаимодействий между антигеном и антителом. Установление образовавшегося комплекса антиген-антитело выполняют с использованием особого фермента, который служит в качестве метки, регистрирующей сигнал взаимодействия.
Преимущества ИФА при диагностике патологических процессов: Специфичность иммуноферментного анализа на высоком уровне. Достаточная простота и чувствительность метода ИФА. Высокая каталитическая активность, способствующая выявлению метки во время реакции антиген-антитело при минимальной концентрации возбудителя.
Метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка нуклеиновой кислоты ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях in vitro. Метод ПЦР имеет очень высокую информативность и позволяет легко и эффективно определять наличие микобактерии в организме, но, только если проводить анализ мокроты если это туберкулез органов дыхания или мочи при туберкулезе орагнов мочевыделительной системы , а не крови. ПЦР анализ крови на туберкулез нельзя считать информативным, так как ДНК микобактерии туберкулеза в крови бывает только у больных туберкулезным сепсисом, что на практике встречается весьма редко. Полимеразная цепная реакция ПЦР позволяет всего в течение нескольких часов обнаружить возбудителя инфекции, причем выявить можно даже 1-2 молекулы среди огромного количества.
Дезоксирибонуклеиновая кислота представляет собой биологический полимер, который обеспечивает хранение, передачу и реализацию генов. Состоит из множества молекул, называемых нуклеотидами. РНК — это рибонуклеиновая кислота, еще один вид биологического полимера, который по своему химическому строению близок к ДНК. Молекула РНК также состоит из множества звеньев — нуклеотидов. Именно РНК является носителем генетической информации у ряда вирусов. Кроме этого, рибонуклеиновая кислота выполняет передачу данных от ДНК к белку.
Эта последовательность всегда уникальна, за исключением некоторых схожих участков ДНК, которые отвечают за однообразие в пределах одного вида. При помощи методики ПЦР можно найти даже мельчайшие фрагменты нуклеиновой кислоты, чтобы определить, к какому виду принадлежит микроорганизм. Однако анализ ДНК небольшого количества микробов достаточно мало информативен, из-за чего требуется увеличить количество нуклеотидов. Именно с этими целями используется ПЦР, позволяющий многократно дублировать цепочку нуклеотидов. Катализатором такого процесса выступают нити РНК, они крепятся к изучаемому гену. В результате всего за несколько часов из одного фрагмента можно получить достаточно биологического материала для изучения.
После изобретения метода ПЦР были изучены и зафиксированы уникальные нуклеотидные последовательности праймеры длиной 15-30 штук , характерные только для конкретного патогена. Если поместить такие праймеры в пробирку с исследуемым материалом, в котором есть ДНК или РНК «живых» патогенов, начнется реакция репликации — создание большого количества копий, которые можно визуально идентифицировать. И при расчете результатов сотрудники лаборатории могут определить, присутствуют ли в исследуемом образце определенные бактерии и вирусы, поэтому результаты анализа в основном качественные. Метод ПЦР строго специфичен и при правильном выполнении не может дать ложноположительного результата. То есть, если инфекции нет, анализ никогда не покажет, что она есть.
Когда следует бежать в лабораторию, чтобы проанализировать итоги вашего летнего отпуска? Специалисты советуют делать это в следующих случаях: выделения, зуд, чувство жжения в области половых органов, резко изменившийся запах от половых органов, дискомфорт при мочеиспускании, необычный характер выделений цвет, количество, консистенция , случайный половой контакт без применения презерватива. Чаще всего его используют для диагностики именно заболеваний, передающихся половым путем.
В этих случая обычно материалом для исследования является мазок. Например, мазок на хламидии у женщин берут из влагалища, у мужчин — из уретры. Для анализа биоматериалом могут быть и слюна, и кровь, и моча, и выделения половых органов. В любом случае нельзя ограничиваться только одним методом. Лучше всего комбинировать различные методы исследования — помимо определения самого возбудителя методом ПЦР необходимо оценивать и иммунный ответ организма, который определяется традиционными уже серологическими методами, например, ИФА. И помните: положительный ответ любого, даже самого современного лабораторного исследования — это повод не для паники, а для визита к врачу. Источники Ravichandran S. VB10, a new blood biomarker for differential diagnosis and recovery monitoring of acute viral and bacterial infections.
Diagnostic concordance of clinical diagnosis, tissue culture, and histopathology testing for skin and soft tissue infections: A single-center retrospective study. Pre- and peroperative diagnosis of Cutibacterium acnes infections in shoulder surgery: A systematic review. Clinical usefulness of metagenomic next generation sequencing for the diagnosis of central nervous system infections in people living with HIV. Just the facts: Diagnosis and treatment of urinary tract infections in older adults. A novel method for the detection and diagnosis of virus infections in honey bees.
Что такое ПЦР?
- ПЦР: сверхчувствительная диагностика инфекций
- Метод анализа ПЦР: суть и преимущества | Подготовка и проведение анализа ПЦР
- Улучшение качества обследования пациентов с помощью ПЦР-лаборатории
- ПЦР анализ: когда нужно сдавать, как проводится исследование, методы диагностики заболеваний
- ПЦР или ИФА: что лучше, отрицательно, положительно, чем отличается
ПЦР: сверхчувствительная диагностика инфекций
Исследование является одним из основных методов диагностики различных инфекционных заболеваний с половым путем передачи. К ним относятся патологические процессы, вызванные: вирусами герпетическая, папилломавирусная инфекция , ВИЧ СПИД, вирусные гепатиты с парентеральным путем передачи специфическими бактериями сифилис, гонорея, микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидиоз простейшими трихомониаз Полимеразная цепная реакция также может использоваться для диагностики инфекций, вызванных условно-патогенными грибами кандидоз. Какой материал исследуется? Материалом, который используется для лабораторного исследования методом ПЦР, являются различные биологические жидкости организма человека. В зависимости от локализации и характера диагностируемого заболевания, это может быть: мазок со слизистой оболочки урогенитального тракта моча.
В итоге невролог, электрофорез, остеопат сделали свое дело. Вот такие дела.
А лучшей рекомендацией для клиники и врача с моей стороны стал даже не этот отзыв, а уже 3 моих знакомых, ставших посетителями этого мед центра. Написал лишь потому, что чувства благодарности переполняют! Дмитрий Я долго искал причину своего недуга, обойдя множество врачей в своём городе, понял, что помочь мне они не смогут. Отправился в Москву, в «частную практику» к доктору Волохову Евгению Александровичу, где он порекомендовал пройти расширенную диагностику, которая позволила выявить суть моего заболевания и, поставив правильный диагноз, приступить к лечению. Евгению Александровичу огромная благодарность! Доктор настоящий профессионал своего дела, выслушает, расскажет все подробно, не оставив вопросов и сомнений, а ещё важно, что не навязывает ненужных услуг, как многие другие персонажи.
Если возникнет потребность - категорически рекомендую! Персонал в клинике замечательный, приветливые администраторы, профессиональные врачи и медсестры оставляют впечатление, что ты в надёжных руках. Родион Осипов Спасибо большое за помощь и эффективное лечение! Все понравилось, за три приёма поняли, что лечение было выбрано в самую точку, помогало и сейчас помогает, наблюдаюсь и вижу очевидные результаты!!! Проконсультироваться по своим вопросам, не пожалела на меня времени, много всего рассказала, дала несколько рекомендаций, к которым я прислушалась. Очень приятная и грамотная.
Видеотур по клинике.
А вот обследоваться просто так, без симптомов, на ВПЧ, герпес, цитомегаловирус, а также условные патогены уреаплазму, микоплазму гоминис, кандиду на этапе планирования беременности нет необходимости, так как результаты диагностики, какими бы они не оказались, ни на что не повлияют. Их не лечат, если нет признаков болезни. Какой метод диагностики выбрать? Клиники предлагают готовые пакеты услуг: ПЦР на разное количество инфекций — от 3 до 16. На самом деле метод полимеразной цепной реакции действительно незаменим только при определении четырех возбудителей половых инфекций, это: ВПЧ HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45 и др. Из этого списка ПЦР на ВПЧ назначают женщинам старше 30 лет 1 раз в пять лет или тогда, когда есть изменения на шейке матки.
ПЦР на герпес при отсутствии проявлений инфекции не имеет никакого смысла. Остается анализ ПЦР на микоплазму и хламидию — это мелкие бактерии, выявить их другими методами можно, но гораздо сложнее. Хламидии вызывают всевозможные воспаления в мочеполовой системе. Хроническая инфекция может осложняться образованием спаек в малом тазу, а значит болями и, возможно, бесплодием. Считается, что даже бессимптомный хламидиоз опасен, хотя достоверных данных и прогнозов на этот счет нет. По существующим стандартам , если хламидию нашли, это нужно лечить. Чтобы выявить микоплазменную инфекцию, сдают количественный ПЦР, чтобы определить, сколько именно бактерий поселилось внутри.
Только микоплазма гениталиум считается патогеном, если она обнаружена в анализах, требуется лечение. Количество микробных клеток и наличие симптомов не имеет значение. Для других инфекций, передающихся половым путем, существуют не менее достоверные, но более дешевые и простые анализы: на сифилис — анализ крови на антитела, микроскопия отделяемого половых органов при наличии проявлений инфекции; на гонорею, трихомониаз, кандидоз — микроскопия мазка, бактериологический анализ; на ВИЧ, гепатиты В, С — ИФА и ПИФ — иммунологические исследования крови. Простой мазок и бактериологический анализ дают, порой, гораздо больше информации об интимном здоровье, чем ПЦР на 16 инфекций, так как показывают не только наличие и количество возбудителя, но и его чувствительность к различным антибиотикам, а также признаки воспаления. Резюме 1. Найдите доверенного гинеколога или уролога для мужчин и посещайте его раз в полгода-год даже если ничего не беспокоит. Врач направит вас на обследование, если будет необходимость.
Появились жалобы со стороны мочеполовых органов, особенно если вы не исключаете инфекцию, постарайтесь посетить врача в течение нескольких дней.
Такой анализ позволяет выявить инфекции мочеполового тракта у мужчин и мочевыделительных органов у женщин. Применяется для обнаружения туберкулеза и некоторых других заболеваний легких. В основном применяется для обнаружения заболеваний, которые передаются половым путем, а также коронавируса. Их забирают методом биопсии. Преимущества и недостатки метода ПЦР отличается от других исследований тем, что может обнаружить несколько разных возбудителей одновременно.
Для него нужно сдать только один анализ, никаких дополнительных тестов не требуется. В тесте пишется концентрация выявленных у ДНК и РНК микроорганизмов, если берется мазок из носа или ротовой полости, а также к какому классу они принадлежат. То есть присутствует четкое понимание, к какому типу относится возбудитель и каково его количество. Мало, много, либо его вообще нет в организме». По словам Андрея Кондрахина, к одному из минусов теста относятся сложности при заборе материала: «Самый первый недостаток метода — необходима абсолютная чистота в помещении, ближе к стерильности, потому что попадание даже мельчайших инородных объектов может дать неправильный результат из-за того, что чувствительность аппарата очень высокая. Сразу начнется увеличение концентрации этих частиц, которое машина может прочитать.
Второе — чтобы пошла реакция, нужны специальные материалы, праймеры. Для каждой реакции есть свои праймеры — кусочки, из которых будут создаваться новые РНК.
Какие ПЦР-анализы можно сдать бесплатно
- ПЦР анализ: когда нужно сдавать, как проводится исследование, методы диагностики заболеваний
- Что такое ПЦР-диагностика
- Микробиологические исследования
- Что такое ПЦР
Анализ ПЦР — что это такое?
- Что такое ПЦР анализ
- Рибосомальная 16S РНК, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и секвенирование биополимеров
- Анализ ПЦР: суть метода и его преимущества
- ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции
- Основные принципы