Подробное описание: что такое ПЦР-тест на ковид, что показывает и как узнать результат. Как проводится забор биоматериала, как подготовиться. Подробное описание процедуры и результатов в нашей экспертной статье. ПЦР или, иначе, полимеразная цепная реакция – это современный высокоинформативный метод молекулярно-генетической диагностики, активно применяемый для выявления у человека различных инфекционных и наследственных заболеваний. Подробное описание: что такое ПЦР-тест на ковид, что показывает и как узнать результат. Как проводится забор биоматериала, как подготовиться. Подробное описание процедуры и результатов в нашей экспертной статье. По словам чиновника, ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является самым точным методом молекулярно-генетической диагностики, который позволяет определить присутствие в организме вируса Covid-19. Чаще всего ПЦР-тест показывает ложноположительный результат из-за наличия в носу или ротоглотке фрагментов уже погибшего вируса, рассказал в интервью Лайфу доктор медицинских наук, практикующий врач, профессор Антон Ершов.
Что такое ПЦР тест на коронавирус и как правильно сдавать мазок
Положительный результат такого теста требует обязательной проверки методом ПЦР (полимеразной цепной реакции). При такой диагностике ПЦР-тестов при любом вирусе мы получаем ложноположительный результат и везём пациента в стационар. читайте в медицинском журнале клиники Адмиралтейские Верфи. – Тест ПЦР (полимеразная цепная реакция), наоборот, показан в первые дни заболевания, поскольку по мере дальнейшего течения инфекции чувствительность этого метода снижается – вирус уже перестает выделяться из верхних отделов дыхательных путей. «ПЦР делается либо стандартный тест, либо экспресс-тест.
Всегда ли положительный тест на COVID-19 означает, что пациент заразен?
Ну, вы поняли - это цепная реакция! Тем не менее, этого хватает, чтобы получить рабочие концентрации ДНК, с которыми можно уже делать серьезное дело. Аппаратная база. Бедняга Муллис и его последователи сначала использовали тупо три водяных бани с разной температурой, вручную перемещая из одной в другую ценные пробирки с реакцией. Мы на практике в универе почему-то делали так же...
Но как только мир понял, что ПЦР - это офигенно, сразу появились лабораторные приборы, которые этот процесс автоматизируют. Фактически это просто нагревательный блок, способный очень точно держать температуру в течение заданного времени и быстро его менять. Сейчас их на рынке пруд пруди, на любой вкус и цвет, чуть ли не кофе умеют готовить. Но как нам это все помогает при анализах на вирус?
Вот такой милаха прогонит ПЦР за полчасика Медицинское применение. Причем ее может быть изначально очень мало, но цепной характер реакции позволит нам ее приумножить. Но если изначально целевой ДНК в пробе нет, то и реакция не пройдет. Добавляем полимеразу и праймеры, которые сядут именно и только на определенное место в ДНК какого-то интересующего нас патогена ДНК патогена ведь сильно отличается от нашей.
Запускаем реакцию и смотрим, прошла она или нет! Если прошла - значит, пациент был заражен этим патогеном, а на нет и суда нет. Получился очень точный, быстрый и относительно дешевый метод выявления патогенов - прикиньте, раньше пока анализ на какую-нибудь бактерию высеешь на питательную среду, дождешься, чтобы оно подросло, определишь, что выросло - несколько дней пройдет. А тут готовый результат за пару часов!
Осталось только подобрать такие праймеры, чтобы они садились "отжигались" действительно только на ДНК патогена, а не на человеческую ДНК. Этот трудоемкий процесс и называется созданием тест-системы - наверняка слышали такое словосочетание в новостях! Этим занимаются, как правило, крупные компании, вкладывающие в этот процесс большие деньги и время.
Например, впервые ПЦР была использована таким образом для диагностики серповидно-клеточной анемии путем обнаружения мутации одного гена. Как проводится ПЦР-анализ Метод полимеразно-цепной реакции постоянно развивается. Самым распространенным на сегодня является тест в реальном времени, с помощью которого можно определить исходное количество копий ДНК РНК. ПЦР с вложенной парой праймеров гнездовая проводится в две стадии для снижения вероятности амплификации неспецифичных участков ДНК. Инвертированная ПЦР используется в случае, когда нужно выяснить природу неизвестных участков ДНК, окружающих известный. Это только часть методов ПЦР, количество которых постоянно пополняется новыми технологичными вариантами. Для проведения анализа биоматериала с помощью ПЦР необходимо обеспечить его правильное взятие.
При взятии мазка из носоглотки или ротоглотки образец биоматериала собирают путем введения длинного зонда-тампона в ноздрю или в заднюю часть горла. Во время анализа крови медицинский работник возьмет образец из вены на руке с помощью небольшой иглы. Количественный ПЦР в реальном времени позволяет также оценить инфекционную нагрузку, а также определить момент, когда условно-патогенные микроорганизмы стали патогенными в результате неконтролируемого роста. Список источников Mousa G. Ghannam; Matthew Varacallo.
Тут, помимо положительного и отрицательного результата, есть еще и сомнительный — это когда человек только заболевает и белок еще не выработался в нужных для определения объемах. В таких случаях рекомендуется переделать анализ через 5 дней. Правила сдачи ИФА на ковид Подготовка к тесту на антиген будет следующей: За сутки отказаться от алкогольных напитков, даже пива и вина. За 12 часов — не пользоваться средствами антисептики и обезболивания для ротовой полости аэрозоли для орошения горла, рассасывающие таблетки, полоскания. За 4 часа — не курить. За 2 часа — не чистить зубы и не пользоваться ополаскивателем для рта. За 2 часа — не кушать и не пить в случае сильной жажды можно сделать пару глотков чистой воды минимум за полчаса до взятия мазков. Не пользоваться жевательной резинкой. Что насчет заграницы, куда пускают?
Инкубационный период составляет до шести дней. За это время инфекция может поразить большое количество людей. Если вовремя сделать ПЦР-тест, пациент будет изолирован. Это предотвратит распространение вируса. Кому и как проводят ПЦР-тест на ковид? Подобные исследования проводят повсеместно с целью сдерживания опасной инфекции. В большинстве случаев это происходит добровольно, но иногда обязанность обусловлена требованиями закона. Сдать ПЦР-тесты должны все путешественники, прибывающие в Россию. Причем условия одинаковы не для всех. Для иностранцев отрицательный результат теста — фактически пропуск в страну. Соотечественники же могут посетить лабораторию позднее. Сделать это должен: любой человек с признаками ОРВИ; член семьи пациента, у которого диагностирована коронавирусная инфекция; потенциальный контактный гражданин, который находился в общественных местах без маски или общался с больным; медработник, лечивший зараженного. ПЦР-тест проводится путем забора мазка из носоглотки. Сделать его можно в лаборатории или вызвав врача на дом. Реакцию запускают в лабораторных условиях. Результат теста: как интерпретировать? Для полимеразной цепной реакции требуются сутки. Однако с учетом загруженности лабораторий сроки ожидания могут увеличиться до двух-трех дней. Результат трактуется однозначно. Отрицательный тест на вирус позволяет допустить его отсутствие в организме. Почему только допустить? Результат исследования может быть неточным. При получении ложноотрицательного есть вероятность, что: забор материала осуществлялся с нарушениями; анализ был взят на поздней стадии заболевания; вирус не попадал в носоглотку или быстро спустился по дыхательным путям; человек продезинфицировал полость рта антисептиком перед забором материала. Вероятность ложноположительного результата невелика.
В России появился новый вид ПЦР-теста
Поэтому ПЦР-анализ часто используют в криминалистике. Зато он с большой вероятностью займёт верхние дыхательные пути, что позволит найти его на слизистых оболочках носоглотки и зёва. Именно по ним медик проводит длинной «ватной палочкой», собирая материал. Изнутри носоглотка и ротоглотка выстланы эпителием — слизистым покровом, клетки которого часто меняются.
Снимает их заглатываемая пища и напитки. Это может помешать проведению ПЦР-теста. Поэтому за 4 часа до его начала нужно отказаться от еды и воды.
Их недавнее употребление нередко приводит к ложноотрицательному результату из-за слущивания эпителия, где успел размножиться коронавирус. Чистка зубов и ополаскивание рта тоже под 4-часовым запретом.
Это может помешать проведению ПЦР-теста.
Поэтому за 4 часа до его начала нужно отказаться от еды и воды. Их недавнее употребление нередко приводит к ложноотрицательному результату из-за слущивания эпителия, где успел размножиться коронавирус. Чистка зубов и ополаскивание рта тоже под 4-часовым запретом.
Средства гигиены временно избавляют полость рта от следов вируса, которые ищет ПЦР-анализ. От спреев для носа и горла тоже придётся отказаться. Антисептические свойства алкоголя исключают его употребление перед тестированием.
Роспотребнадзор предлагает отказаться от спиртного за двое суток до ПЦР. Забор материала может быть не самым приятным процессом.
Но при каждом чихании или недомогании делать ПЦР-тест — дорогое удовольствие. На помощь пришли экспресс-тесты, но корректность их результатов вызывает сомнение. Есть еще вариант — иммуноферментный анализ ИФА , в простонародье — тест на антиген. Делается он так же, как и ПЦР, но быстрее, стоит дешевле, да и за границу в некоторые страны с ним уже пускают. Что еще за тест на антиген? Для начала попробуем разобраться в том, что такое ИФА, и в сути реакции «антиген — антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом.
В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела иммуноглобулины , способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс реакция «антиген — антитело».
Специфические изменения в легких видны только на 5-6 день заболевания. При этом ПЦР-тест может быть отрицательным. И процент таких ложноотрицательных результатов очень высок, - говорит завкафедрой вирусологии Российской медицинской академии непрерывного профессионального образования Елена Малинникова. Однако и этого недостаточно, ведь каждый день промедления влияет на исход лечения. А тут еще вирусная нагрузка".
Мясников рассказал, почему при положительном ПЦР-тесте человек не болен COVID
Иммунолог объяснил, почему ПЦР-тесты дают ошибочный результат. метод применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека. ПЦР тест на коронавирус назначается пациентам с явными признаками заболевания. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал. «ПЦР делается либо стандартный тест, либо экспресс-тест. – Тест ПЦР (полимеразная цепная реакция), наоборот, показан в первые дни заболевания, поскольку по мере дальнейшего течения инфекции чувствительность этого метода снижается – вирус уже перестает выделяться из верхних отделов дыхательных путей.
Что такое ПЦР
ПЦР-тест представляет собой наиболее эффективный метод тестирования при диагностике вирусных инфекций. ПЦР-тест точнее всего определяет COVID-19 на третий-пятый день с момента появления симптомов, а экспресс-тест на антиген можно делать с первого дня. ПЦР расшифровывается как “полимеразная цепная реакция”.
ПЦР: сверхчувствительная диагностика инфекций
Вариантов может быть несколько, в зависимости от подсчитанного количества: если иммуноглобулинов данного типа немного, то COVID-19 находится на начальном этапе развития; если количество зашкаливает, значит сейчас острая фаза. В это время человек все еще является разносчиком инфекции, даже если у него нет никаких симптомов; присутствие IgM в небольшом количестве в сочетании с IgG указывает на завершение болезни. Иммуноглобулин типа G производится в острой стадии и остается в крови после выздоровления, обеспечивая иммунитет длительное время. Если тест показал наличие антител к коронавирусу типа IgG, значит у вас уже есть иммунитет к данному заболеванию и вы не представляете опасности для окружающих. Небольшое количество иммуноглобулинов свидетельствует о том, что вы переболели недавно. Какой тест сдавать? Оба варианта тестов являются эффективными, но в большинстве случаев мы рекомендуем делать тест на антитела, так как он более универсальный. Быстрее - Сейчас в лабораториях большие очереди по ПЦР-тестам и результатов можно ждать от 3 до 5 дней.
По антитела результаты будут готово в течение 3-х дней. Доступность - ПЦР-тест стоит дороже, так как тест-системы более дорогие. ПЦР-тест необходим для того, чтобы выявить инфекцию на ранней стадии, до развития иммунного ответа. Его рекомендуют делать в тех случаях, когда тест на антитела дал отрицательный или неоднозначный результат.
Он также может быть проведен двумя методами: определением количества частиц вируса в крови или методом ПЦР. Данный вариант показан для выявления стадии инфекции, например, перехода острой формы гепатита С в хроническую, а также для контроля эффективности лечения заболевания. Анализ на вирусную нагрузку не заменяет другие необходимые исследования, так как не показывает стадию повреждения печени и тяжесть течения болезни.
Для определения этих показателей необходимы биохимическое исследование крови и биопсия тканей печени. Для данного исследования берут кровь из вены.
Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов.
Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды вода, почва и т. В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов. Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим комплементарен с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.
После соединения гибридизации матрицы с праймером отжиг , последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции. Ход реакции Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий.
Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров. Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом.
Время стадии — 0,5 - 2 минут. ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации.
Он говорит, что лечение должно в первую очередь зависеть от симптомов, а не от результатов теста.
Многие медицинские лаборатории уточняют, что тест для определения антител классов М и G — это вспомогательный метод диагностики COVID-19. Его результат должен интерпретировать врач. Доктор Комаровский обращает внимание на то, что в США регулярно публикуют данные об ошибочных результатах тестов. Почему не выявляют такие лаборатории и не обнародуют данные?
Если результат не всегда верный, зачем вообще сдавать тест на антитела? При невозможности исследования мазков методом амплификации нуклеиновых кислот ПЦР-анализ. Для выявления людей с бессимптомной формой инфекции. Для установления факта перенесенной ранее инфекции.
Для отбора потенциальных доноров иммунокомпетентной плазмы. Кроме того, лаборатория напоминает, что массовое тестирование на антитела помогает понять масштабы пандемии и проследить формирование коллективного иммунитета к COVID-19 коллективный иммунитет образуется, когда доля людей с иммунитетом к заболеванию достаточно велика, чтобы помешать передаче вируса в обществе. Недавно медицинская компания «Инвитро» подвела итоги 3 месяцев тестирования белорусов на антитела к коронавирусу. Перепечатка материалов CityDog.
Подробности здесь. Фото: synevo.