Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это метод молекулярно-генетической диагностики, позволяющий обнаружить в организме человека различные инфекционные заболевания. У вас положительный результат теста на COVID-19. Тест на полимеразную цепную реакцию (ПЦР) на COVID-19 – это молекулярный тест, который анализирует ваш образец верхних дыхательных путей в поисках генетического материала SARS-CoV-2.
Анализ ПЦР
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — метод молекулярной биологии. В результате известные фрагменты оказываются на обоих концах неизвестного участка, после чего можно проводить ПЦР как обычно. Если человек сдал тест на коронавирус, а результат оказался положительным, то это означает, что он является носителем вируса, в данный момент болеет COVID-19 или уже вылечился, но в его организме сохранились антитела. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это метод молекулярно-генетической диагностики, позволяющий обнаружить в организме человека различные инфекционные заболевания.
Результаты ПЦР диагностики
Тест на полимеразную цепную реакцию (ПЦР) на COVID-19 – это молекулярный тест, который анализирует ваш образец верхних дыхательных путей в поисках генетического материала SARS-CoV-2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — высокоточный метод диагностики заболеваний, основанный на копировании ДНК или РНК патогена в пробе. Содержание. Что делать, если пришел положительный результат анализа COVID-19. Полимеразная цепная реакция почти для каждого из нас стала обыденностью, даже если этот каждый никогда и слов таких не слышал. Полимеразная цепная реакция — метод, позволяющий обнаружить конкретный генетический материал в образце. — Ложноположительный результат — это когда пациент не инфицирован коронавирусом, но лаборатория выдала положительный результат теста на SARS-CoV-2 методом ПЦР.
ПЦР ДИАГНОСТИКА. Что это такое?
Количественные результаты оцениваются непосредственно врачом, поскольку этот показатель индивидуален. Ещё одно достоинство метода — он обнаруживает даже мизерное количество вирусов и бактерий и, соответственно, распознаёт болезнь, когда видимых клинических проявлений ещё нет. Благодаря этому лечение начинается на первичной стадии, задолго до того как появляются разного рода осложнения. ПЦР более объективен, чем многие другие иммунологические способы диагностики, поскольку практически не даёт ложно-положительных ложно-отрицательные значительно более редки ввиду высокой чувствительности метода.
Заведующая московской лабораторией молекулярной диагностики «Инвитро» Наталья Гасилова назвала «Доктору Питеру» еще несколько причин, которые могут приводить к выдаче ложных результатов ПЦР-теста.
Ложноотрицательный — когда человек на самом деле инфицирован, но лаборатория выдает «-». Как получают ложноположительные результаты? Основная причина — так называемая кросс-контаминация, перекрестное загрязнение одного образца содержимым другого. Это может произойти на любом этапе тестирования — взятии мазка, транспортировки или уже в лаборатории.
Тогда для загрязнения достаточно попадания капель или даже аэрозоля с этого образца, — говорит Наталья Гасилова. Есть также требование — оставлять зонд, которым берется биоматериал, в пробирке. Его полагается отламывать или отрезать ножницами.
Если заболевание протекает в активной стадии, пациенту требуется пройти лечение. Если ПЦР отрицательный, а анализ на антитела положительный, что это значит? Подобное может произойти вследствие нескольких факторов: Остаточный или иммунологический след, который остается в результате выработки иммуноглобулина. Пациент перенес данное заболевание в прошлом, возможно бессимптомно и не является больным на момент обследования. В подобном случае необходима детализация анализов крови и консультация врача, ведь нужно разобраться, что именно дает положительную реакцию. Что делать, если пришел положительный ПЦР анализ? К сожалению, симптомы некоторых заболеваний не всегда видны, и в организме человека таятся скрытые инфекции.
После получения положительного результата ПЦР, не стоит сразу паниковать и волноваться. Существует вероятность ложно-позитивной реакции ПЦР.
Также с помощью ПЦР возможно установление отцовства, родства двух людей. Но это тема для отдельного разговора. Для исследования забирают биоматериал. Какой именно — зависит от конкретных показаний. Обычно берут мазки со слизистых оболочек полости рта, половых органов, уретры. В качестве исходного образца изучают мочу, кровь, мокроту, слюну. Есть отдельные условия по подготовке и проведению диагностики полимеразной цепной реакции. Что можно обнаружить методом ПЦР По результатам обследования есть возможность выявить группу патологических процессов.
Папилломатоз Провоцируется особым одноименным вирусом. Вызывает образование на коже и внутренних органах хорошо знакомых многим наростов. В самом простом случае, речь идет о бородавках. Но существуют и другие аномальные структуры. Например, невус родинка , остроконечная кондилома. Последние образуются на репродуктивных органах и в области заднего прохода, передаются половым путем. Многие штаммы вируса папилломы человека а известно их более 150 потенциально онкогенны. Способны спровоцировать рак. Потому ПЦР незаменима при ранней диагностике и разработке индивидуальных мер профилактики, лечения. Герпес Любого типа.
Известно более 6-и штаммов этого вируса. Первый провоцирует образование папул в полости рта и на губах. Второй — транспортируется половым путем и плохо поддается коррекции. Третий — это вирус Варицелла-Зостер, которые вызывает ветряную оспу. Четвертый становится виновником мононуклеоза. Пятый — цитомегалии. Шестой влияет на работу головного мозга. Так можно продолжать и далее. Суть в том, что с помощью ПЦР удается выявить сам герпес и его штамм, определить характер и давность поражения, патологического процесса. В этом суть диагностики.
Гепатит Воспаление печени. Полимеразная цепная реакция назначается не только для определения самого факта расстройства. Суть в другом. ПЦР диагностика инфекций дает возможность дифференцировать септические и токсические, прочие формы гепатита, определить конкретный штамм вируса, который спровоцировал патологический процесс. Кандидоз Молочница. Вызывается грибком с идентичным названием. Поражает слизистые оболочки.
Чем ПЦР отличается от антител и какой анализ россиянам нужно сдавать при подозрении на ковид?
Что представляет собой ПЦР Анализ абсолютно специфичен. При правильном выполнении он не может дать ложноположительный результат, поэтому его используют для диагностики инфекционных и наследственных заболеваний, для установления отцовства, клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов. В основу положена возможность значительно увеличивать малые концентрации определенных фрагментов ДНК. Для исследования потребуется небольшое количество биоматериала, например крови, слюны или мазок из половых органов. Анализ проводят в искусственных условиях in vitro. ДНК содержит генетическую информацию любого живого организма. Молекула состоит из двух цепочек, сплетающихся в единую спираль. Их последовательность уникальна для каждого организма, как отпечаток пальца или скан сетчатки глаза. Поскольку для каждого возбудителя зарегистрированы типичные укороченные последовательности нуклеотидов, то они хранятся в лабораториях в виде праймеров. Их в свою очередь присоединяют к ДНК возбудителя в пробе, и они многократно воспроизводят свои дубли под действием катализаторов.
Многократное увеличение происходит до тех пор, пока участок не станет доступным для определения и только при наличии в биоматериале ДНК патогена. Преимущества ПЦР-диагностики Заслуженная популярность метода заключается в простом исполнении, показателях чувствительности и специфичности.
Сколько по времени его делают долго или результат теста на ковид делается сразу? Если отсутствуют симптомы или, когда уже переболел, надо делать тест? И что это исследование значит на коронавирус надо сдать кровь или мазок? Из нашей статьи вы узнаете о том, откуда берётся клинический материал, как проводится исследование и влияют ли правила подготовки и прочие требования на его точность.
Что такое ПЦР анализ на коронавирус и что он показывает? Что такое метод полимеразной цепной реакции? Что он показывает и как выглядит? Если проводится анализ ПЦР на ковид, это означает, что при проведении особого лабораторного теста пробы биоматериала пациента подвергаются молекулярной диагностике, позволяющей выявить коронавирус. В процессе исследования будет проведена обработка проб химическим реагентом, что вызовет выделение фрагментов генетического материала возбудителя вируса SARS-CoV-2. Чтобы чужеродные нуклеиновые кислоты стали заметны для лабораторного оборудования их количество увеличивают посредством амплификации ферментом полимеразой и воздействия слабых электрических токов.
После этого по наличию или отсутствию светящихся полосок оранжевого цвета будут определять контагиозность «заразность» обследуемого пациента. Кроме того, определив этиологию заболевания врач верно подберёт терапевтичекую тактику и подходы к лечению пациента. Метод ПЦР на коронавирус: как делается забор биоматериала? Основным видом биологического материала является отделяемое зева и носа. Поэтому сдаётся на анализ мазок из ротоглотки или носоглотки, но чаще всего делают оба мазка. Процедура забора образцов слизистой, которую требует ПЦР тест на коронавирус, может быть неприятной, но важно, что она не занимает более нескольких десятков секунд, а её результат показывает заражён человек в действительности или нет.
А как берут мазок?
Хотя самые первые тесты, рекомендованные к применению в феврале, отличались немного пониженной чувствительностью. Кроме того, есть и фактор «врача»: в одном случае у пациента могли взять побольше вируса и его система «увидела», в другом — в пробирку попало меньше вирусных частиц, и ответ был ложно-отрицательным. Он включает несколько этапов.
Первый этап -высвобождение нуклеиновой кислоты из вируса занимает минут 30-40 , потом идет этап обратной транскрипции — превращение РНК в ДНК и ПЦР-амплификации 1,5 часа. Каждый набор реагентов, как правило, поставляется в комплекте для анализа 96-ти образцов. Поэтому цифры поставленных тест-систем иногда плавают: кто-то считает комплектами, кто-то единицами тестов. Более корректно считать в единицах.
А сегодня нам сообщают, что Россия поставляет тест-системы в 30 стран мира. У нас действительно хватает тестов на всю страну? У нас исторически хорошие мощности по производству такого рода реагентов. Если в Москве мы обнаруживали положительный образец, должны были контрольную копию доставить в Новосибирск.
Пока анализы доставлялись туда, потом обратно, проходило как раз несколько суток.
Итак, вторая стадия - присоединение праймеров к ДНК также называется отжигом длится от 20 до 60 секунд. Температура отжига равна 50 - 65 градусам для каждого вида возбудителей, то есть для каждого праймера, она своя. На этом этапе мы уже разделили ДНК на две половинки и не даём им соединиться. Теперь самое время достроить каждую половинку до полноценной ДНК. Но температура, при которой это должно произойти, очень высока, по меркам молекулярной биологии — более 70 градусов выше температуры отжига. Проблема была решена благодаря открытию уникального фермента taq-ДНК-полимеразы, содержащегося у бактерий, обитающих в гейзерах.
Особенность этого фермента заключается в его исключительной термостойкости период полужизни при 95 градусах составляет 40 минут и высокой рабочей температуре — оптимум работы 72градуса. В клетках, фермент ДНК-полимеразы отвечает за копирование и "ремонт" ДНК и способен удлинять короткие нуклеотидные цепочки праймеров, последовательно присоединяя к одному из концов праймера дополнительные нуклеотиды, таким образом, достраивая цепь до конца. Так ДНК копирует саму себя. Третий этап - достраивание цепей ДНК. Комплементарное достраивание цепей ДНК происходит от конца к концу цепи в противоположных направлениях, начиная с участков присоединения праймеров. Материалом для синтеза новых цепей ДНК служат добавляемые в раствор "кирпичики" - все те же производные аденина, гуанина, цитозина и тимина. Процесс синтеза катализируется ферментом термостабильной ДНК-полимеразой Taq-полимеразой и проходит при температуре 70 - 72 градуса.
Время протекания синтеза зависит от длины достраиваемого фрагмента и обычно принимается равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. Теперь мы имеем две двойные цепочки ДНК вместо одной, исходной. Ну а дальше процесс повторяется. Опять температура повышается до 93 - 95 градусов, цепочки разъединяются... Обычно за 1 - 2 часа при наличии вирусной ДНК ее становится столько, что не заметить ее, даже при стандартном методе обнаружения становится просто нереально. Схематично, это выглядит так: Подведём итог: каждый цикл ПЦР состоит из трех стадий. В первую стадию денатурация происходит так называемое раскручивание ДНК — то есть разделение связанных между собой двух цепей ДНК.
Во вторую отжиг - происходит присоединение праймера к участку нити ДНК. И, наконец, в заключительной третьей стадии, "фермент-строитель" достраивает нити, восстанавливая ДНК. В настоящее время весь этот сложный процесс протекает в одной пробирке и состоит из повторяющихся циклов размножения амплификаций определяемой ДНК с целью получения большого количества копий, которые могут быть, затем выявлены обычными методами. То есть из одной нити ДНК мы получаем сотни тысяч или миллионы копий.
Диагностика COVID-19: обзор основных методов
Такие антитела сохраняются долгое время после выздоровления. Биоматериалом для исследования антител является кровь из вены. До сдачи анализа нельзя есть в течение восьми часов, запрещено ужинать накануне жирной пищей, а за 24 часа — пить алкоголь и употреблять лекарства. Кроме того, за два часа до сдачи крови нельзя курить, физически и эмоционально перенапрягаться, пить можно только негазированную воду. Также нежелательно сдавать тест на антитела после медицинских процедур: физиотерапии, инструментального обследования, рентгенологического и ультразвукового исследования, массажа и так далее. Напомним, в мае портал Юга. В материале также объясняется, кому в первую очередь стоит проверить себя на ковид или наличие антител, на что обратить внимание при выборе теста, как подготовиться к забору анализов и что делать, если результат окажется положительным.
Он поясняет, что вирус в носоглотке зараженного появляется примерно за неделю до появления симптомов и продолжает выделяться в среднем еще две недели после их начала. Обзор 28 исследований показывает, что ПЦР-тест остаётся положительным в среднем 18 дней. При этом они никак не являются источниками инфекции. Берут с большим запасом: не менее 10 дней от начала симптомов, плюс 3 дня после их исчезновения", - добавляет Мясников. Он также пояснил, что при анализе на антитела определяют не сам вирус, а его "следы". Антитела к коронавирусу появляются в среднем через 8-12 дней от начала симптомов. Первые IgM выявляются раньше, и через 4-6 дней после их появления начинают снижаться и исчезают. Поэтому их наличие говорит о том, что вы переносите острую фазу болезни. Напомню: сразу после наступления симптомов IgM не определяются, они появятся в середине болезни и будут сопровождать ее до выздоровления.
Исследования для оценки эффективности лечения, как правило, проводят через 1—2 недели после последнего приёма препарата. Подготовка к ПЦР-анализу мочи За 24 часа до анализа следует исключить из рациона продукты, меняющие цвет и химический состав мочи: алкогольные напитки, «красящие» овощи — свёклу и морковь, а также специи и соль. По согласованию с врачом лучше отказаться от приёма мочегонных препаратов. Перед взятием биоматериала необходимо тщательно вымыть наружные половые органы. Женщинам рекомендуется обработать половые губы ватными тампонами: сначала — смоченными в тёплой воде с мылом, затем — смоченными в чистой воде. Движения тампона должны быть направлены от лобка к заднему проходу. Лишнюю влагу удалить чистой салфеткой. Мужчинам следует тщательно вымыть отверстие мочеиспускательного канала тёплой водой с мылом, оттянув кожную складку, промыть водой и промокнуть чистой салфеткой. Биоматериал следует собрать в одноразовый стерильный контейнер. Его можно бесплатно получить в любом лабораторном отделении Гемотест. Инструкция по использованию контейнера Открутите крышку контейнера и положите её, не касаясь внутренней части крышки. Соберите первую порцию мочи в контейнер. Если мочу на анализ берут у ребёнка, можно использовать мочеприёмник.
Эти вещества тупо стоят длинной цепочкой, крепко сшитые химическими связями. Прикол в том, что ДНК состоит из двух таких цепочек, причем вторая является зеркальной копией первой это называется умным термином "обратная комплементарность". Как так вышло? Дело в том, что помимо сильных связей с соседями по цепи, нуклеотиды умеют образовывать еще и относительно слабые водородные связи, причем А и Т всегда будут иметь две связи, а G и С - три. Таким образом, напротив А в одной цепи всегда будет стоять Т в другой, и та же фигня с G и С. Легко понять, что такие цепи, по сути, несут одну и ту же информацию. А так как двойная спираль ДНК значительно более устойчива к воздействию извне, то в ходе эволюции на заре истории Земли цепи решили подружиться и жить вместе. Тем более, что такая дружба дала им одно очень важное преимущество. Репликация ДНК. Рано или поздно клетке надо будет поделиться, обеспечив рост организма или размножение. При этом всю эту хитро упакованную многометровую махину ДНК надо аккуратно скопипастить так, чтобы две дочерние клетки получили максимально точную копию оригинала. Вот тут-то и пригодилась двойная спираль - специальные белки в нужный момент расцепляют цепи, и на основании каждой цепи достраивается ее комплементарная копия. Отвечает за это фермент под названием полимераза. Она ползет по старой одиночной цепи ДНК и вставляет в новую цепь буквы, комплементарные старой. Видит А - вставляет Т, видит G - C, ну вы поняли. Чтобы полимераза могла сесть на одиночную цепь ДНК и начать свое дело, ей нужна затравка - это уже готовый маленький кусочек второй цепи, сидящий на первой. Его еще называют праймер. В клетках его делает специальный фермент праймаза, да и вообще там на самом деле жесть все как сложно, но об этом в другой раз. Адская схема репликации. Все, что надо понять - была одна двойная спираль, а стали две, и помогли им в этом, помимо все прочего, праймеры и полимераза.
Чем ПЦР отличается от антител и какой анализ россиянам нужно сдавать при подозрении на ковид?
Анализ делают 1,5—2 суток. Результат оценивается либо положительно, когда бактерия или вирус выявляются в исследуемом образце, либо отрицательно, что означает отсутствие инфекции в организме. Кроме того, ПЦР дает информацию о количестве возбудителя, что важно при выборе схемы лечения. Количественные результаты оцениваются непосредственно врачом, поскольку этот показатель индивидуален.
Поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно через 48 часов после сдачи биологического материала, что дает возможность своевременно начать лечение. Возможность количественного анализа. Эта характеристика важна при выявлении заболеваний, вызываемых условно патогенной микрофлорой например, кандидоза. К недостаткам ПЦР-диагностики можно отнести необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Кроме этого, из-за крайне высокой чувствительности есть риск неверного результата, если пациент инфицирован сразу несколькими видами микроорганизмов.
Специфичность и применение Анализ методом полимеразной цепной реакции стал «золотым стандартом» для выявления ряда инфекций. Сегодня можно говорить о том, что такое исследование проверено временем, а строгие клинические испытания только подтвердили его эффективность и точность. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в образце присутствует всего несколько молекул ДНК. ПЦР диагностирует наличие патогенов, которые растут в течение длительного времени, не прибегая к трудоемким процедурам, что особенно важно в гинекологии и урологии при выявлении различных урогенитальных инфекций, передающихся половым путем. Такой анализ позволяет обнаружить даже одну бактериальную или вирусную клетку, что зачастую невозможно при использовании других иммунологических, бактериологических или микроскопических методик. Метод эффективен даже для форм микроорганизмов, которые трудно диагностировать или невозможно культивировать в лабораториях. Именно поэтому процедуру часто применяют для обнаружения скрытых и хронических инфекций. В основе специфичности такого анализа — образование комплементарных комплексов между матрицей и праймерами — небольшими синтетическими нуклеотидами.
В результате этого каждая из таких частей комплементарна с одной из цепей двуцепочечной матрицы, то есть позволяет выявить начало и конец участка. Метод обладает высокой антигенной изменчивостью, поэтому очень эффективен для выявления внутриклеточных микроорганизмов. С помощью метода ПЦР можно обнаружить патогены не только в полученном клиническом материале от пациента, но даже в мазке с поверхностей и т. Поэтому методика имеет широкую сферу применения.
Когда разрушенные участки генетического материала уже погибшего возбудителя еще сохраняются в крови или биологических средах. Результат становится отрицательным по истечении шести-девяти месяцев после терапии. Какой врач проводит расшифровку ПЦР-исследований Первично назначается анализ либо венерологом, либо урологом, либо гинекологом для женщин. Оценка анализа и выставление результатов в бланке ответа — это функция врача-лаборанта, проводившего исследование.
Дальнейшая интерпретация полученных данных — это функционал узкого специалиста, к которому обращается пациент. Врач назначает такие исследования обычно при: признаках острого воспаления урогенитального тракта, для уточнения причины воспаления, перед планируемой беременностью или эко, у беременных с отягощенной акушерской историей, для контроля эффекта от проводимого лечения по поводу вензаболевания не раньше, чем спустя месяц после окончания терапии , в качестве скрининга для исключения бессимптомного течения инфекции при наличии более одного партнера за год. Методы молекулярной биологии имеют важное от культуральных или серологических методик отличие. Они не требуют определенного накопления возбудителя или антител к нему и чувствительны практически сразу от момента заражения. Нет смысла выдерживать паузу в течение предполагаемого инкубационного периода венерической инфекции. Анализ можно сдавать сразу после того, как возникли подозрения о возможном заражении или развитии инфекционного агента.
У человека берут биологический материал из ротоглотки.
При этом зондом нельзя собирать слюну и касаться щек, языка, десен или губ. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя. В некоторых лабораториях могут озвучить результаты анализа уже на следующий день. За три часа до сдачи анализа нельзя есть, пить, курить, полоскать рот и жевать жвачку. Что показывает тест на антитела IgM и IgG? Это дополнительный метод диагностики, который может уточнить стадию заболевания или показать, что человек уже переболел ковидом.
Диагностика методом ПЦР: современный подход выявления инфекционных и генетических заболеваний
В зависимости от причины проведения ПЦР-теста положительный результат может указывать на наличие исследуемого возбудителя. Отрицательный результат будет говорить об отсутствии возбудителя в организме. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это метод молекулярно-генетической диагностики, позволяющий обнаружить в организме человека различные инфекционные заболевания. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — высокоточный метод диагностики заболеваний, основанный на копировании ДНК или РНК патогена в пробе. Содержание. Ученые из Италии проверили, может ли появиться жизнеспособный вирус в дыхательных путях людей, выздоровевших от COVID-19 и потом снова получивших положительный результат ПЦР-теста. У подавляющего большинства таких пациентов, скорее всего, нет вируса. medium ПЦР (Полимеразная цепная реакция) Если попытаться описать ПЦР-диагностику в трёх словах, то это, совершенно определённо, будут слова ТОЧНО, НАДЁЖНО, БЫСТРО. medium ПЦР (Полимеразная цепная реакция) Если попытаться описать ПЦР-диагностику в трёх словах, то это, совершенно определённо, будут слова ТОЧНО, НАДЁЖНО, БЫСТРО.