В плане обнаружения ДНК наибольшее распространение получил метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR) — метод молекулярной биологии, позволяющий создать копии определенного фрагмента ДНК из исходного образца, повысив его содержание в пробе на несколько порядков.
Диагностика ВИЧ: методы и исследования
Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. производстве и внедрении высокотехнологичного оборудования и реагентов для исследований методом ПЦР. Многочисленные исследования по изучению применения метода ПЦР для выявления Сhlamydia trachomatis.
Что такое ПЦР-тест? Методика, преимущества и недостатки анализа
Особенно в случаях получения сомнительных результатов, когда симптомы свидетельствуют об одном, а лабораторное исследование о противоположном. Постановить окончательный диагноз могут помочь дополнительные исследования, такие как иммуноблотинг для иммуноферментного анализа. Отличия ИФА и ПЦР диагностических методов: Иммуноферментный анализ позволяет установить лишь факт контакта организма с возбудителем инфекции. В то время как при помощи полимеразной цепной реакции возможно определить какой именно возбудитель проник в организм. Благодаря ИФА, реально подтвердить или опровергнуть факт распространенности инфекционного процесса в любом участке организма. Метод ПЦР же предназначен для обнаружения возбудителя только в исследуемом образце, то есть биологических жидкостях, фрагментах органов и тканей, которые были предоставлены для исследования. Для проведения иммуноферментного анализа пригоден абсолютно любой материал для исследования кровь, моча, слюна, частички органов и тканей. Потому как иммуноглобулины при ответе организма на проникновение возбудителя могут находиться где угодно. Для исследования путем полимеразной цепной реакции берется тот биологический материал, где предположительно может присутствовать возбудитель. Как видно из перечисленных особенностей каждого лабораторного исследования различия между ИФА и методом ПЦР существенные. Если коротко сформулировать, то ИФА направлен на обнаружение продуктов жизнедеятельности белков-маркеров.
А ПЦР нацелен на установление конкретного возбудителя, который может относиться к группе бактерий, вирусов или грибков.
В настоящее время весь этот сложный процесс протекает в одной пробирке и состоит из повторяющихся циклов размножения определяемой ДНК с целью получения большого количества копий, которые могут быть, затем выявлены обычными методами. То есть из одной нити ДНК мы получаем сотни или тысячи. Этапы проведения ПЦР исследования Забор биологического материала для исследования В качестве пробы служит различный биологический материал: кровь и ее компоненты, моча, слюна, отделяемое слизистых оболочек, спинномозговая жидкость, отделяемое раневых поверхностей, содержимое полостей тела.
Все биопробы собираются одноразовыми инструментами, а набранный материал заключают в пластиковые стерильные пробирки или помещают на культуральные среды, с последующей транспортировкой в лабораторию. В забранные пробы добавляют необходимые реагенты и ставят в программируемый термостат — термоциклер амплификатор. В амплификаторе 30-50 раз повторяется цикл ПЦР, состоящий из трех этапов денатурация, отжиг и удлинение. Что это означает?
Рассмотрим подробнее. При этом «затравка» для выявления, например, хламидии, работает только для хламидии и т. Таким образом, если тестируется биоматериал на наличие хламидийной инфекции, то в реакционную смесь помещается «затравка» для хламидий; если тестирование биоматериала на вирус Эпштейн-Барра, то и «затравка» для вируса Эпштейн-Барра. II этап — Объединение генетического материала возбудителя инфекции и «затравки».
Этот процесс присоединения «затравки» и есть второй этап ПЦР.
Максим Ионов подчеркнул, что в лабораториях существует не только физический поток образцов, который идет по всем этапам выполнения ПЦР-исследования, но и поток информации об образце — от направления на анализ до результата. Программа называется FRT Manager, и ее задача — автоматизировать ПЦР-амплификацию на всех этапах: до запуска термоциклера, во время его работы и после получения результатов. Интерфейс FRT Manager единый для всех этих приборов, что исключает ошибки, когда сотрудник переключается с одного термоциклера на другой. При этом могут быть запущены разные приборы, как планшетные, так и роторные, и одновременно может выполняться ПЦР-диагностика разных инфекций. Кроме того, большой проблемой для персонала в пандемию была необходимость переносить результаты из ПО прибора в лабораторный журнал, в ЛИС и обеспечивать своевременную выдачу результатов. FRT Manager позволяет получать и печатать результаты в формате лабораторного журнала, индивидуальных бланков для пациентов или выгружать все данные в ЛИС. Докладчик отметил, что это еще неполная автоматизация и цифровизация, так как она затрагивает только один из шагов — ПЦР-амплификацию.
Преимуществом данного метода является возможность не только выявить бактерию, но и возможность получить антибиотикограмму, на основе которой врач назначает точное лечение. Наиболее часто бакпосев используют для диагностики уреаплазмоза, микопламзоза, трихомониаза, хламидиоза, различных форм кандидоза. Правила сдачи анализа на бакпосев: за сутки не спринцеваться, не пользоваться вагинальными свечами; за сутки до анализа воздержаться от половых контактов; за неделю прекратить прием антибиотиков; не опорожнять мочевой пузырь за 1,5-2 часа. Молекулярная диагностика ПЦР ПЦР-диагностика, или полимеразная цепная реакция, направлена на определение специфической нуклеотидной последовательности участка ДНК возбудителя инфекции внутри клетки, чего нельзя добиться при мазке или бакпосеве. ПЦР-анализ часто используется для выявления: хламидиоза, уреаплазмоза, микоплазмоза, гениального герпеса, гонореи, трихомониаза. Данный метод способен выявить возбудителя даже на стадии инкубационного периода, однако он не дает представления об активности вируса, как это дает ИФА. Кроме того, ПЦР может не выявить генитальный герпес и цитомегаловирус в соскобе с влагалища, если вирус находится в "спячке" - для выявления данных инфекций рекомендуется использовать метод иммуноферментного анализа. Правила сдачи материала на ПЦР-диагностику такие же, как при бакпосеве.
А как обнаружить скрытые инфекции у мужчин и женщин?
- Что такое анализ ПЦР? - статья лаборатории ДНКОМ
- Принципы ПЦР-диагностики
- СВЯЗАТЬСЯ С РЕДАКЦИЕЙ
- Что такое ПЦР?
- Как часто сдавать ПЦР анализ на ЗППП если ничего не беспокоит?
- Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Особенности
Читать в статьях по темам:
- Что такое анализ ПЦР?
- ПЦР-исследования
- ПЦР: сверхчувствительная диагностика инфекций
- Методы диагностики ЗППП
Преимущества метода ПЦР
- Как проводят анализ методом ПЦР: описание процедуры
- В чем преимущество данного метода?
- Что такое ПЦР-тест? Методика, преимущества и недостатки анализа | РИА Новости | Дзен
- ПЦР-анализ: что это такое, когда он назначается и как проводится?
- ПЦР анализ 12: что это такое? Подготовка и сдача анализа, расшифровка результатов
- ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции
Анализ ПЦР: суть метода и его преимущества
Широкое использование стандартной конфигурации 96-луночного планшета позволило унифицировать оборудование, необходимое для проведения иммуноферментного анализа. В 1972 г. Рубенштейн с сотр. Метод получил название гомогенного ИФА и был основан на учете различий каталитических свойств ферментной метки в свободном виде и в иммунохимическом комплексе. В дальнейшем термин «гомогенный иммуноанализ» стал применим к любой системе иммуноанализа, в которой специфическая реакция взаимодействия антигена с антителом и определение глубины ее протекания осуществляются в гомогенном растворе. Отсутствие стадии разделения свободного и меченого анализируемого соединения привело к сокращению времени проведения анализа до нескольких минут. Это исключительно важное обстоятельство позволило разработать диагностические иммуноферментные тест-системы экспресс-определения биологически активных соединений, нашедшие широкое применение в химической токсикологии, фармакологии, эндокринологии. Основной принцип ИФА — специфическое связывание антитела с мишенью. Для получения антител первоначально использовали иммунизацию животных обычно кролика очищенным белком. Однако в этом случае получали смесь антител к разным антигенным детерминантам молекулы-мишени. Такую смесь антител называют поликлонильным препаратом.
Использование поликлональных антител имело два существенных недостатка: 1 содержание отдельных антител в поликлональном препарате может варьировать от одной партии к другой; 2 поликлональные антитела нельзя применять, если необходимо различать сходные мишени, то есть когда патогенная мишень и непатогенная не-мишень формы различаются единственной детерминантой. Этим объясняются многочисленные «перекрестные» положительные реакции, которые приводят к ошибочным диагнозам. Еще один серьезный недостаток: для получения антител каждый раз необходимо заново иммунизировать животных и очищать выделенную сыворотку. Это стоит немалых денег. Благодаря разработке метода получения моноклональных антител МАТ с помощью техники гибридом стало возможно получение препаратов антител к одной антигенной детерминанте. Мильштейн и Г. Келер за разработку техники получения гибридом, вырабатывающих МАТ с запрограммированной специфичностью, получили в 1984 году Нобелевскую премию в области медицины и физиологии. Они рассчитывали использовать гибридомы лишь для изучения генетики антител, а результат привел к подлинному буму. В основу метода положен давно известный принцип гибридизации слияния соматических, неполовых, клеток с последующим выделением и культивированием необходимого гибридного клона. Для слияния используют клетки двух видов.
Первые — плазмоцитомы опухолевые плазмоциты из линий, культивируемых в искусственных условиях, invitro. Как и все злокачественные клетки они интенсивно размножаются без всякого внешнего стимула. Другие клетки —иммунные лимфоциты. Они несут в себе способность синтезировать и выделять необходимые антитела. Однако в пробирке эти клетки существуют лишь несколько дней. Образовавшийся при слиянии двух клеток гибрид наследует признаки обоих «родителей». К настоящему времени получены тысячи разнообразных МАТ, несколько тысяч гибридом, в т. Преимущества МАТ: Главная особенность МАТ — чрезвычайная моноспецифичность против одной антигенной детерминанты и абсолютная однородность. Возможность многократного получения в течение длительного времени воспроизводимость.
Исследования для оценки эффективности лечения, как правило, проводят через 2—4 недели после приёма антибактериальных препаратов. Подготовка к ПЦР-анализу слюны За 24 часа до исследования по предварительному согласованию с лечащим врачом следует отказаться от терапии полости рта какими-либо лекарственными препаратами. За 3 часа до исследования рекомендуется отказаться от курения, употребления пищи и гигиены полости рта полоскание, чистка зубов, применение освежителей для рта, употребление леденцов, жевательной резинки. Подготовка к ПЦР-анализу мокроты За 2 недели до исследования по согласованию с лечащим врачом следует прекратить приём противомикробных препаратов и иммуномодуляторов. Мокроту следует собирать утром, сразу после пробуждения. Предварительно нужно почистить зубы и прополоскать рот, нельзя есть до взятия биоматериала. Важно собирать не слюну или носоглоточную слизь, а мокроту. Сделайте несколько глубоких вдохов, чтобы вызвать «мокрый» кашель. Необходимо откашлять содержимое глубоких дыхательных путей. Сплюньте мокроту в заранее подготовленный стерильный контейнер с плотно закрывающейся крышкой. Минимальный объём мокроты — 1 мл. Доставьте контейнер в лабораторное отделение в день взятия биоматериала. Подготовка к соскобу из зева За 24 часа до исследования по предварительному согласованию с лечащим врачом следует отказаться от терапии полости рта какими-либо лекарственными препаратами.
Стабильность при образовании комплексов антиген-антитело. Процесс «узнавания» анализируемого комплекса чувствительным к нему иммуноглобулином осуществляется в количественном соответствии. Используется два подхода для количественной оценки анализируемых иммунных комплексов. Первая — это определение концентрации образовавшихся иммунных комплексов. А вторая — измерение концентрации не вступивших в реакцию антител. Иммунологический метод диагностики нацелен на обнаружение иммуноглобулинов трех классов: Антитела ИГ М. Антитела ИГ А. Антитела ИГ G. Сначала в организме человека в течение первых 10—15 суток появляются иммуноглобулины типа М. Далее, в ходе инфекционного процесса, к первым присоединяются антитела типа А. В более запущенных стадиях заболевания, вырабатываются иммуноглобулины G. Обнаружение при помощи иммуноферментной реакции иммуноглобулинов конкретного типа, позволяет определить, на какой стадии находится патология.
Амплификация увеличение числа копий ДНК Важнейший этап исследования. Проводится в термоциклере и именно здесь проходят все процессы, подпадающие под определение полимеразно-цепная реакция: денатурация, отжиг, элонгация. Денатурация Самый первый этап — развернуть денатурировать нуклеиновые кислоты, чтоб сделать их доступными для дальнейшей работы. Благодаря запрограммированному участку, праймеры прикрепляются только к тем нуклеиновым кислотам, для которых были созданы. Например, праймер для вируса простого герпеса 1 типа, никогда не свяжется с ДНК другого вируса, микроорганизма или клетки. Именно праймеры обусловливают крайне высокую специфичность ПЦР — способность реагировать только на нуклеиновые молекулы конкретных типов, видов классов и даже штаммов микроорганизмов. Или отдельные виды клеток живых организмов. Элонгация Или синтез. После завершения процесса отжига, в реакционной смеси создают условия для активности полимеразы. Которые становятся копиями исходных, искомых молекул нуклеиновых кислот. Такой температурный цикл проводится 30 и более раз. В результате, даже при изначально небольшом количестве искомого генетического материала, в реакционной смеси накапливается значительное число «помеченных» праймерами нуклеиновых кислот растет экспоненциально, с удвоением при каждом цикле. В среду агар или полиакридный гель добавляют краситель ДНК например — бромистый этидий. В процессе сеанса электрофореза, молекулы нуклеиновых кислот движутся и формируют скопления, подкрашенные этидием. Под ультрафиолетом, это выглядит в виде полосок разной толщины и яркости. Метод гибридизации.
Как проводят анализ методом ПЦР: описание процедуры
При самолечении и самостоятельной сдаче анализов для исследования методом ПЦР в сетевой лаборатории высок риск того, что вы будете годами лечиться от несуществующей болезни. • При необходимости исследования единого первичного образца разными диагностическими методами первая аликвота должна отбираться для ПЦР‐анализа наконечником с фильтром. Молекулярно-биологические исследования с применением метода полимеразной цепной реакций (ПЦР).
В Роспотребнадзоре объяснили, чем отличается экспресс-тест на COVID-19 от ПЦР
Почему новый штамм «Омикрон» особо опасен — Основное преимущество нашей разработки — скорость и возможность использования в любой лаборатории, работающей с ПЦР, — сообщила руководитель научной группы генной инженерии и биотехнологии ЦНИИЭ Анна Черкашина. Альтернатива нашему тесту — процесс секвенирования — занимает от 30 до 60 часов и требует специального оборудования, расходных материалов и специально обученных сотрудников. Недостаток теста ПЦР в том, что он дает информацию только о наличии или отсутствии короткого списка конкретных мутаций. В процессе секвенирования прочтения генома вируса.
Однако он требует больше времени и стоит гораздо дороже ПЦР. Однако в условиях быстрого распространения нового штамма необходимы и более простые методы его обнаружения. Их удалось разделить на варианты «Дельта» и «Омикрон» с высокой точностью.
Увидел — победил Новый метод — простой, быстрый и недорогой, подчеркивают в Роспотребнадзоре. Он позволит быстро отличить «Омикрон» от «Дельты» и предпринять необходимые меры, чтобы не допустить распространения опасного штамма.
Диагностика с помощью этого метода позволяет найти возбудителя, присутствующего в исследуемых материалах. Это — наиболее точный анализ на половые инфекции, скрытые инфекции и другие заболевания, передающиеся половым путем. Кроме этого, с помощью ПЦР сегодня определяется наличие коронавируса и ряда других инфекционных болезней, которые передаются воздушно-капельным путем. Полимеразная цепная реакция является эффективным диагностическим инструментом, который позволяет врачу не только точно определить тип инфекционного возбудителя в организме пациента, но и выявить количество патогенов. Эта помогает обнаруживать хронические инфекции, например, вирусный гепатит. Отличие ПЦР-диагностики от других методик лабораторных исследований заключается в следующем: Метод направлен на идентификацию самого возбудителя.
Диагностика универсальна и может использоваться для выявления нескольких патогенов. Для точной диагностики достаточно только одного биологического образца пациента. Метод обладает высокой чувствительностью и не сопровождается другими перекрестными реакциями. Для анализа подходит любой биологический материал пациента: возможно изучение мазка, мочи, спермы и т. Если говорить о других преимуществах методики, то можно отметить следующее: Специфичность. Поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно через 48 часов после сдачи биологического материала, что дает возможность своевременно начать лечение. Возможность количественного анализа. Эта характеристика важна при выявлении заболеваний, вызываемых условно патогенной микрофлорой например, кандидоза.
К недостаткам ПЦР-диагностики можно отнести необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Кроме этого, из-за крайне высокой чувствительности есть риск неверного результата, если пациент инфицирован сразу несколькими видами микроорганизмов. Специфичность и применение Анализ методом полимеразной цепной реакции стал «золотым стандартом» для выявления ряда инфекций.
На каждом цикле амплификации синтезированные ранее фрагменты вновь копируются ДНК-полимеразой. Благодаря этому происходит многократное увеличение количества специфических фрагментов ДНК, что значительно упрощает дальнейший анализ. Методика проведения анализа с использованием метода ПЦР включает три этапа: 1. Амплификация специфических фрагментов ДНК. Детекция продуктов амплификации.
Суть пробоподготовки заключается в экстракции извлечении ДНК из биопрепарата и удалении или нейтрализации посторонних примесей для получения препарата ДНК с чистотой, пригодной для постановки реакции амплификации. В настоящее время существуют различные методы выделения нуклеиновых кислот: экспресс -метод, выделение НК при помощи осаждения на носителе, фенольно-хромофорный метод метод Хом-чинского. Амплификация - увеличение количества ампликонов в ходе многократно обычно 30-50 раз повторяющихся циклов раундов денатурации, гибридизации и удлинения цепей. Процесс синтеза катализируется ферментом Тад-полимеразой.
Такое бывает, когда мазок берут со слизистой носовых ходов и ротовой полости, а не из носоглотки и ротоглотки. Эспресс-тесты проводятся для обнаружения антигенов коронавируса — белковых частиц, которые входят в состав вируса и распознаются иммунной системой. Экспресс-тесты на COVID-19 достаточно просты в использовании, а их проведение не требует специальной лаборатории и больших временных затрат результат бывает готов через 15-30 минут. Специальных навыков для проведения экспресс-тестирования также не требуется. По этой причине экспресс-тесты часто используются в учебных заведениях, на рабочих местах, в пунктах экспресс-тестирования в общественных местах, а также непосредственно на приёме врача.
ПЦР-анализ: что это такое, когда он назначается и как проводится?
В процессе секвенирования прочтения генома вируса. Однако он требует больше времени и стоит гораздо дороже ПЦР. Однако в условиях быстрого распространения нового штамма необходимы и более простые методы его обнаружения. Их удалось разделить на варианты «Дельта» и «Омикрон» с высокой точностью. Увидел — победил Новый метод — простой, быстрый и недорогой, подчеркивают в Роспотребнадзоре. Он позволит быстро отличить «Омикрон» от «Дельты» и предпринять необходимые меры, чтобы не допустить распространения опасного штамма. Причем использовать метод можно в тех лабораториях, где нет специального оборудования для секвенирование. Ученые подчеркивают, что на данном этапе разработка будет Об эффективности российской вакцины Владимир Путин рассказал на неформальном саммите СНГ использоваться только как лабораторная методика и не будет регистрироваться как коммерческое медицинское изделие. Хотя тесты ПЦР сильно уступают в точности выявления конкретных штаммов, метод может найти применение в части научных исследований, рассказали «Известиям» опрошенные эксперты.
Наиболее часто бакпосев используют для диагностики уреаплазмоза, микопламзоза, трихомониаза, хламидиоза, различных форм кандидоза. Правила сдачи анализа на бакпосев: за сутки не спринцеваться, не пользоваться вагинальными свечами; за сутки до анализа воздержаться от половых контактов; за неделю прекратить прием антибиотиков; не опорожнять мочевой пузырь за 1,5-2 часа. Молекулярная диагностика ПЦР ПЦР-диагностика, или полимеразная цепная реакция, направлена на определение специфической нуклеотидной последовательности участка ДНК возбудителя инфекции внутри клетки, чего нельзя добиться при мазке или бакпосеве. ПЦР-анализ часто используется для выявления: хламидиоза, уреаплазмоза, микоплазмоза, гениального герпеса, гонореи, трихомониаза. Данный метод способен выявить возбудителя даже на стадии инкубационного периода, однако он не дает представления об активности вируса, как это дает ИФА. Кроме того, ПЦР может не выявить генитальный герпес и цитомегаловирус в соскобе с влагалища, если вирус находится в "спячке" - для выявления данных инфекций рекомендуется использовать метод иммуноферментного анализа. Правила сдачи материала на ПЦР-диагностику такие же, как при бакпосеве. ПЦР - наиболее точный и современный метод диагностики.
Встречаются такие ситуации, когда результат может быть подготовлен в тот же день. Расшифровка анализа ПРЦ Процесс интерпретации представленного исследования отличается своей простотой. Результаты пцр анализа можно получить через 1,5-2х суток после сдачи материала. В некоторых случаях результат готов в первый же день, и вот что они могут означать: Отрицательный результат показывает, что в диагностируемом материале отсутствует искомый инфекционный возбудитель. В некоторых случаях производят количественное определение микроорганизмов. Это особенно актуально при заболеваниях, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Так как данные бактерии проявляют свое негативное воздействие лишь при избыточном количестве. Также количественный анализ ПЦР важен для выбора терапевтической тактики и с целью контроля над лечением таких вирусных инфекций, как ВИЧ и вирусы гепатита. Насколько точна ПЦР диагностика инфекций? Метод ПЦР отличается высокой точностью, специфичностью и чувствительностью. Это означает, что данный анализ способен: точно определить наличие или отсутствие инфекции; точно указать, что именно это за инфекция специфичность ; обнаружить инфекцию даже при очень низком содержании ДНК микробов в биологическом материале, который был подвергнут исследованию чувствительность. ПЦР анализ: цена и сроки Цена конкретного анализа будет зависеть от того, на какую инфекцию вы будете проверяться.
Подготовка к ПЦР-анализу слюны За 24 часа до исследования по предварительному согласованию с лечащим врачом следует отказаться от терапии полости рта какими-либо лекарственными препаратами. За 3 часа до исследования рекомендуется отказаться от курения, употребления пищи и гигиены полости рта полоскание, чистка зубов, применение освежителей для рта, употребление леденцов, жевательной резинки. Подготовка к ПЦР-анализу мокроты За 2 недели до исследования по согласованию с лечащим врачом следует прекратить приём противомикробных препаратов и иммуномодуляторов. Мокроту следует собирать утром, сразу после пробуждения. Предварительно нужно почистить зубы и прополоскать рот, нельзя есть до взятия биоматериала. Важно собирать не слюну или носоглоточную слизь, а мокроту. Сделайте несколько глубоких вдохов, чтобы вызвать «мокрый» кашель. Необходимо откашлять содержимое глубоких дыхательных путей. Сплюньте мокроту в заранее подготовленный стерильный контейнер с плотно закрывающейся крышкой. Минимальный объём мокроты — 1 мл. Доставьте контейнер в лабораторное отделение в день взятия биоматериала. Подготовка к соскобу из зева За 24 часа до исследования по предварительному согласованию с лечащим врачом следует отказаться от терапии полости рта какими-либо лекарственными препаратами. Подготовка к соскобу из влагалища или урогенитального тракта За 30 дней до исследования следует прекратить применение антибиотиков по согласованию с лечащим врачом.
ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции
Особенности ПЦР — альтернатива клонированию для получения, в сущности, неограниченных количеств интересующей ДНК-последовательности. ПЦР за несколько часов может избирательно увеличить в количестве единственную молекулу ДНК до нескольких миллионов копий, что революционизировало как молекулярную диагностику, так и молекулярный анализ генетических болезней. ПЦР — ферментативное «умножение» или амплификация фрагмента ДНК, расположенного между двумя олигонуклеотидами, так называемыми праймерами. Праймеры разрабатывают таким образом, что первый комплементарен одной нити молекулы ДНК с одной стороны целевой последовательности, а второй — другой нити противоположной стороны этой же последовательности. Затем, используя последовательность между праймерами как шаблон, с помощью ДНК-полимеразы синтезируются две новые нити ДНК.
Вновь синтезированные комплементарные нити ДНК формируют следующую копию исходной целевой последовательности. Регулярные циклы тепловой денатурации, гибридизации праймеров и ферментативного синтеза ДНК приводят к экспоненциальному росту 2, 4, 8,16, 32,...
Записаться на прием Полимеразно-цепная реакция ПЦР — это одно из самых ярких достижений в сфере молекулярной биологии. Метод получил широчайшее распространение в разных областях науки. Благодаря очень высокой специфичности и чувствительности, метод ПЦР применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека. Принцип ПЦР- исследования У каждого живого существа, по крайней мере, на нашей планете, есть уникальный «отпечаток» - ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота , которая отвечает за передачу наследственных факторов от предков к потомкам. Структурно эта молекула представляет собой две нити из молекул-азотитых оснований, удерживаемые рядом друг с другом химическими связями и скрученные в спираль считается, что для компактности. Из курса биологии вы можете помнить такие названия, как аденин А , гуанин Г , тимидин Т и цитозин ц. Это 4 нуклеотида, которые и создают последовательность ДНК. Вирусы хранят свою генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте — РНК.
После того, как был изобретен метод ПЦР, для многих возбудителей различных заболеваний бактерии, грибки и вирусы были созданы свои специфические генетические детекторы праймеры - уникальные последовательности нуклеотидов, характерных только для конкретного возбудителя. И если поместить их в пробирку с исследуемым материалом, при наличии в нем ДНК или РНК «живых» возбудителей, праймеры запускают реакцию репликации — создания огромного числа копий, которое можно идентифицировать визуально. И при подсчете результатов сотрудники лаборатории могут понять, есть ли искомые бактерии и вирусы в исследуемом образце, или нет, именно поэтому результаты ПЦР чаще всего качественные, то есть «обнаружено» или «не обнаружено». Кому мы обязаны появлением метода ПЦР? Со слов американского биохимика Керри Мюллиса Kary Mullis , идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода ДНК пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга Arthur Kornberg , которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества. Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры.
Благодаря разработке метода получения моноклональных антител МАТ с помощью техники гибридом стало возможно получение препаратов антител к одной антигенной детерминанте.
Мильштейн и Г. Келер за разработку техники получения гибридом, вырабатывающих МАТ с запрограммированной специфичностью, получили в 1984 году Нобелевскую премию в области медицины и физиологии. Они рассчитывали использовать гибридомы лишь для изучения генетики антител, а результат привел к подлинному буму. В основу метода положен давно известный принцип гибридизации слияния соматических, неполовых, клеток с последующим выделением и культивированием необходимого гибридного клона. Для слияния используют клетки двух видов. Первые — плазмоцитомы опухолевые плазмоциты из линий, культивируемых в искусственных условиях, invitro. Как и все злокачественные клетки они интенсивно размножаются без всякого внешнего стимула. Другие клетки —иммунные лимфоциты. Они несут в себе способность синтезировать и выделять необходимые антитела.
Однако в пробирке эти клетки существуют лишь несколько дней. Образовавшийся при слиянии двух клеток гибрид наследует признаки обоих «родителей». К настоящему времени получены тысячи разнообразных МАТ, несколько тысяч гибридом, в т. Преимущества МАТ: Главная особенность МАТ — чрезвычайная моноспецифичность против одной антигенной детерминанты и абсолютная однородность. Возможность многократного получения в течение длительного времени воспроизводимость. Неограниченное количество получаемых антител. По специфичности и чувствительности МАТ достигают значений, предельных для живой природы. Отсюда возможность использования для анализа антигенов не высокой степени чистоты. Метод ИФА находится в постоянном развитии.
С одной стороны, расширяется число объектов исследования, с другой - углубляются и совершенствуются методы самого анализа. Это приводит к тому, что упрощается схема анализа, сокращается время его проведения, уменьшается расход реагентов. Идет постоянный поиск все новых и новых веществ, используемых в качестве маркеров. Все возрастающее влияние на ИФА оказывают химия высокомолекулярных соединений, клеточная и генная инженерия, под влиянием которых меняются технологии получения реагентов для ИФА. Еще одним из важнейших современных методов диагностики заболеваний внутренних органов является ДНК-диагностика методом полимеразной цепной реакции. ПЦР позволяет найти в исследуемом материале небольшой участок генетической информации, заключенный в специфической последовательности нуклеотидов ДНК любого организма среди огромного количества других участков ДНК и многократно размножить его. ПЦР — это циклический процесс, в каждом цикле которого происходит тепловая денатурация двойной цепи ДНК-мишени, последующее присоединение коротких олигонуклеотидов-праймеров и наращивание их с помощью ДНК-полимеразы путем присоединения нуклеотидов. В результате накапливается большое количество копии исходной ДНК-мишени, которые легко подаются детекции. Открытию полимеразной цепной реакции сопутствовало развитие молекулярно-биологических технологий.
Первые данные о химических своиствах ДНК появились в 1868 г. К началу 50-годов ХХ в.
Vysotin S. Polymerase chain reaction as a method of laboratory diagnosis of tuberculosis in HIV-infected. Gilmiyarova F. Polymerase chain reaction.
Discovery history. A new stage of development. Lopukhov L. Polymerase chain reaction in clinical microbiological diagnostics. Nesterov S. Current state and prospects.
New information technologies. Oradova A. Polymerase chain reaction in laboratory diagnostics. Razumovskaya I. Nanotechnology: Manual. Elective Course.
Сколько стоит сдать ПЦР-анализ
ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это молекулярно-биологический метод, в основе которого лежит амплификация (то есть многократное увеличение) фрагментов ДНК в биоматериале. Исследования, проводимые одним из широко применяемых методов – методом, основанным на полимеразной цепной реакции (ПЦР), являются наиболее точными и достоверными. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК/РНК) в биологическом материале (пробе). ПЦР анализ на инфекции Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет выявить у человека различные инфекционные и наследственные заболевания, как в острой и хронической стадии.