Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это лабораторно–диагностическое исследование, позволяющее определить возбудителя той или иной инфекции. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является «золотым стандартом» диагностики вирусного гепатита С. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять генетический материал вирусов (РНК) даже если их в исследуемом материале единицы. Самостоятельно менять ПЦР-тест на, скажем, ИФА-тест не стоит: точность разных лабораторных методик может сильно различаться. Как расшифровать ПЦР Как работает ПЦР тест Ответы на эти и другие вопросы читайте в статье на нашем сайте. Однако в случае с полимеразной цепной реакцией расшифровка результатов ПЦР исследований мало зависит от биологического материала, который брался у пациента.
ПЦР диагностика - анализ на инфекции (+ видео)
ПЦР-тест позволяет определить наличие вируса папилломы, а также его тип и степень угрозы для здоровья. ПЦР или полимеразная цепная реакция — на сегодняшний день самый точный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет узнать, присутствует ли в вашем организме вирус COVID-19. ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это метод тестирования, который способен находить генетический материал вируса непосредственно в крови пациента, слюне или любой другой жидкости, изобретенный в 1983 году американским биохимиком Кэрри Муллисом. ПЦР-тест (Мазок) на Коронавирус. Предназначение у него одно: определить есть ли вирус COVID-19 в организме в данный момент (Real-Time PCR).
Что такое анализ ПЦР?
Однако в случае с полимеразной цепной реакцией расшифровка результатов ПЦР исследований мало зависит от биологического материала, который брался у пациента. Если ПЦР, экспресс-тест и IgM-антитела отрицательные, это скорее всего значит, что в последние 2-3 недели коронавируса у вас не было. ПЦР-тест на ковид – надежный метод, позволяющий определить наличие ДНК вируса в организме с первого дня инфицирования. Минимальная вероятность получить ложноотрицательный результат теста на COVID-19 наступает на восьмой день после заражения, или на третий после появления первых симптомов. Подробное описание: что такое ПЦР-тест на ковид, что показывает и как узнать результат. Как проводится забор биоматериала, как подготовиться. Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.
Что такое ПЦР тест на коронавирус и как правильно сдавать мазок
по Менеджменту антикоагулянтной терапии, утвержденное Министерством Здравоохранения РМ, рекомендует для оценки рисков венозных тромбоэмболий использовать тесты на Д-Димеры со специфичностью не менее 75. Метод ПЦР позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы ДНК микроорганизмов, не выявляемые другими методами. Родоначальником метода ПЦР (полимеразной цепной реакции) считается ученый из Норвегии Х. Клеппе.
ПЦР анализ: что это такое?
Расшифровка результатов ПЦР-анализа на папилломавирус, Digene-теста и их разновидностей не отличаются, поскольку количество микроорганизмов и их тип не зависит от метода обнаружения. Роспотребнадзор напоминает о ключевых особенностях тестирования методом ПЦР и отвечает на самые часто задаваемые вопросы. Молекулярное тестирование, включая тестирование с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), выявляет генетический материал вируса и, таким образом, может определить, инфицирован ли человек SARS-CoV-2 в настоящее время. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция.
ПЦР анализ: что это такое?
Статья автора «РИА Новости» в Дзене: ПЦР-тест — основной метод обнаружения коронавирусной инфекции. Тест на коронавирус, проводимый через полимеразную цепную реакцию, позволяет определить, болеет обследуемый или нет. Статья автора «РИА Новости» в Дзене: ПЦР-тест — основной метод обнаружения коронавирусной инфекции. ПЦР-тест даст более точный результат, если врач возьмет у пациента мазок с первого по пятый день заболевания.
Анализы на ВПЧ. Что это такое и как его берут
Вы узнаете, какова цена этого исследования, где выполняют ПЦР анализы и как готовится, когда требуется сдать ПЦР анализ. Вы узнаете о методиках забора мазков, какой врач берет анализы на ПЦР и почему медсестра плохо берет мазки на ПЦР анализ. Разберем ПЦР анализ: что это такое и как выполняют это исследование. ПЦР анализ: что это такое? ПЦР, или полимеразная цепная реакция, представляет собой метод лабораторного исследования различных биологических жидкостей. В них происходит анализ на предмет присутствия возбудителей инфекционных, паразитарных или вирусных заболеваний. Суть ПЦР состоит в многократном «клонировании» находящихся в исследуемом материале фрагментов ДНК инфекционного агента. ПЦР диагностика инфекций считается наиболее быстрым, современным методом. ПЦР диагностику используют повсеместно. Все ведущие клиники используют диагностику ПЦР для верификации инфекционных заболеваний. Часто пациенты спрашивают, какие именно заболевания можно выявить при помощи метода ПЦР диагностики?
Диагностика методом ПЦР используется для выявления широкого спектра возбудителей.
IgM равен или больше 2 и IgG меньше 10 А это уже показатель абсолютно точного заражения. Человек, у которого такие анализы, болеет в данный момент. Пациента отправят на карантин на 14 дней, а также всех, кто с ним контактировал. Данные передаются в районную поликлинику, и за состоянием человека уже следит терапевт. Чтобы считаться здоровым, после самоизоляции человек должен дважды сдать отрицательный тест на COVID.
И у него не должно быть респираторных симптомов. IgM равен или больше 2 и IgG равен или больше 10 Вероятно, болезнь уже посетила обладателя этих показателей и отступает. Для профилактики пациента отправят на 7-дневную изоляцию. Затем нужно будет снова сделать тест.
Планируя ребенка, необходимо сделать анализ на гепатит Как проводится анализ и требуется ли к нему подготовка Забор крови для ПЦР-исследования производится из вены.
Как правило, это происходит утром до того, как человек поел, поскольку после приема пищи должно пройти минимум 8 часов. В крайних случаях кровь могут взять на исследование днем или вечером, но временной зазор между анализом и приемом пищи должен составлять не менее 5 часов. Качество биоматериала для анализа будет соответствующим при следовании пациентом следующим правилам: перед сдачей крови можно пить только чистую воду; за двое суток до проведения исследования нужно отказаться от приема жареной и жирной пищи, а также алкогольных напитков; за сутки до посещения лаборатории следует прекратить прием лекарственных средств. В случае если это не представляется возможным, об этом в обязательном порядке необходимо предупредить лаборанта и лечащего врача; накануне нужно избегать стрессовых ситуаций и физических нагрузок; не следует проходить ультразвуковое, рентгенологическое и инструментальное исследования незадолго до сдачи крови; в течение часа до анализа необходимо воздержаться от курения; за 20 минут до сдачи крови нужно отвлечься, успокоиться и выровнять дыхание. Если исследование проходит ребенок до 5 лет, родители должны проследить, чтобы он пил кипяченую воду каждые 10 минут в течение получаса до забора биоматериала.
Читайте также: Секрет простаты: как берут анализ Расшифровка полученных данных Расшифровка анализа может быть представлена словами в случае качественного исследования , например, «не обнаружено» или «ниже диапазона изменений». В первом случае, это свидетельствует о том, что инфекция не обнаружена. Во втором — что вирус присутствует, но в незначительном количестве. Такая ситуация требует проведения повторного исследования. Количественны и качественны анализ ПЦР на гепатит позволяет определить наличие вируса в организме и уровень его концентрации.
Полиразмерная цепная реакция способна диагностировать заболевание на ранних стадиях, но для этого необходимо, чтобы больные как можно раньше обращались в медицинские учреждения за помощь и строго следовали рекомендациям лечащего врача.
Полимеразная цепная реакция представляет собой исследование, суть которого заключается в проведении амплификации множественное копирование генетического материала инфекционного агента. Оно необходимо для последующей идентификации генома и видовой принадлежности микроорганизмов. Благодаря ферментативной реакции множественного копирования молекул генетического материала ПЦР обладает высокой чувствительностью. Для выявления и идентификации достаточно нескольких фрагментов ДНК возбудителей в исследуемом биологическом материале. Когда проводится анализ?
Анализы на ВПЧ. Что это такое и как его берут
Они появляются спустя 11-12 недель после заражения. Anti-NS3 отражают острый характер процесса. Anti-NS4 указывают на длительность заболевания и, возможно, имеют определенную связь со степенью поражения печени. В практической деятельности наличие антител к белкам NS3, NS4 и NS5 определяют редко, поскольку это значительно повышает общую стоимость диагностики. Более того, в подавляющем большинстве случаев выявление суммарных антител к гепатиту С и уровня вирусной нагрузки бывает достаточно для постановки положительного результата, определения стадии заболевания и планирования лечения. Кроме того, зарегистрировано более 80 субтипов генома. К каждому из них образуются антитела.
Показания для сдачи анализа Антитела в крови могут обнаруживаться через несколько месяцев после инфицирования. Поэтому человек должен пройти не менее трех тестов в следующих случаях: После незащищенного полового контакта с незнакомым партнером. Доказательств того, что гепатит С может передаваться половым путем, не найдено, однако заболевание часто обнаруживается у пациентов, ведущих беспорядочную интимную жизнь. Гепатит С диагностируют у инъекционных наркоманов. Появление антител в крови возможно после стоматологической операции, нанесения татуировок или после посещения косметолога, однако подобные случаи редки. Перед сдачей крови доноры проходят тест на анти-HCV в обязательном порядке.
Анализы делаются и перед хирургическими вмешательствами. Дополнительные диагностические процедуры показаны и при повышении уровня печеночных ферментов. После контакта с инфицированным проводится несколько анализов через определенные промежутки времени. Массовое тестирование населения в очагах инфекции препятствует эпидемии. Пациент может и сам обратиться к врачу при обнаружении у себя симптомов гепатита. К ним относятся: пожелтение кожных покровов; общая слабость; тошнота и рвота.
Только с помощью анализа на антитела к HCV можно подтвердить наличие вируса. Нередко требуется выявление суммарных антигенов. Что делать если анализ Анти-HCV положительный? Иногда положительный anti-HCV, подтверждающий инфицирование, выявляется случайно при плановом обследовании, подготовке к родам или операции. Случаются ложноположительные результаты, когда человек здоров. Это становится ясно после повторного теста.
Поскольку этого анализа недостаточно для постановки окончательного диагноза, обратившийся проходит дополнительное обследование. При помощи анализа крови биохимии определяют концентрацию трансаминаз и билирубина. Спустя месяц после первого теста анализ на антитела к гепатиту С пересдается. Если РНК вируса выявлена, определяют ее уровень в крови. Если все результаты окажутся положительными, пациенту ставится диагноз — гепатит С, назначается лечение у врача-инфекциониста. Что это такое?
ПЦР — это цепная полимеразная реакция на гепатит. Для анализа требуется специальный аппарат, который определяет количество антител в сыворотке крови в кровяном сгустке. Анализ на ПЦР назначают беременным так как вирус гепатита способен проникать через плацентарный барьер и заражать ребенка и людям, которые контактировали с инфицированными больными. Анализ делается двумя методиками. Качественный показывает, присутствуют ли антитела в русле крови. То есть качественный анализ выясняет, нужно ли лечение для конкретного больного.
Количественный анализ проводится в случае обнаружения маркеров в крови. Специальный аппарат подсчитывает точное количество клеток вируса гепатита. Этот анализ позволяет отслеживать динамику терапии, насколько оно эффективно и не требует ли коррекции. Единственный минус этого анализа: аппарат не способен посчитать количество вируса гепатита, если в крови его практически нет. В крови циркулируют антитела или незначительное количество возбудителя. Такое возможно, если пациент проходит лечение и курс подходит к концу.
Если анализ переделать через 4-6 недель после окончания лечения — результат может оказаться совершенно иным. Поверхностный австралийский антиген и маркеры к нему HBsAg — чужеродный белок, образующий внешнюю оболочку вируса гепатита Б. Антиген помогает вирусу цепляться за печеночные клетки гепатоциты , проникать в их внутреннее пространство. Благодаря ему вирус успешно развивается и размножается. Оболочка поддерживает жизнеспособность вредоносного микроорганизма, дает ему возможность продолжительное время находиться в человеческом организме. Белковая оболочка наделена невероятной устойчивостью к различным негативным воздействиям.
Для выявления микоплазмы целесообразнее брать мочу или соскоб. Но нужно учитывать, что точность уретрального или влагалищного мазка превосходит исследование мочи. Востребованным является ПЦР 6, в который входит хламидиоз , уреаплазмоз , микоплазмоз ДНК mycoplasma genitalium и mycoplasma hominis , гарднереллез , трихомониаз. Показания Анализ ПЦР на ЗППП назначают для дифференциальной диагностики при появлении следующих симптомов: боль внизу живота, в том числе во время полового акта; специфические выделения из влагалища: желтые, серые, зеленые, гнойные, пенистые, водянистые, с неприятным запахом и т. ИППП могут протекать бессимптомно, особенно у мужчин. Но даже при бессимптомном течении их нужно лечить, поскольку они провоцируют возникновение тяжелых осложнений. Показанием к молекулярной диагностике методом ПЦР в урологии и гинекологии является: воспаление шейки матки, простаты, уретры, органов малого таза; бесплодие у мужчин и женщин; эректильные нарушения. Анализ на скрытые инфекции требуется после незащищенного полового акта с постоянным при наличии симптомов ЗППП или незнакомым партнером, на этапе подготовки к беременности , а также по окончанию лечения половых инфекций. Вирусы, как ВПЧ или генитальный герпес не поддаются лечению.
Бактериальные и грибковые инфекции излечимы. Чтобы обнаружить скрытое присутствие вируса герпеса в крови, необходимо сдать анализ на антитела IgG.
Чтобы полимераза могла сесть на одиночную цепь ДНК и начать свое дело, ей нужна затравка - это уже готовый маленький кусочек второй цепи, сидящий на первой. Его еще называют праймер. В клетках его делает специальный фермент праймаза, да и вообще там на самом деле жесть все как сложно, но об этом в другой раз. Адская схема репликации. Все, что надо понять - была одна двойная спираль, а стали две, и помогли им в этом, помимо все прочего, праймеры и полимераза. Так или иначе, в итоге вся ДНК в клетке удваивается, и вот теперь клетка может спокойно делиться.
Прочитали до сюда? Вот теперь можем переходить непосредственно к ПЦР. Ученые уже десятилетия изучают свойства ДНК. Выделяют из живых организмов, синтезируют искусственно... Потому что когда его мало, то труднее ставить эксперименты - проще запороть, загрязнить чем-то чужеродным и т. И тогда в далеком 1983м один любящий галлюциногены ученый Кэри Муллис решил использовать для этого то, что давно уже придумала природа - репликацию, только искусственную, в пробирке. Нобелевку по химии за это получил, кстати... За основу взяли все основное, что есть в "натуральной" репликации - собственно ДНК, полимеразу, свободные буквы-нуклеотиды, чтобы ей было что вставлять в новую цепь, и праймеры - затравку, которая покажет полимеразе, откуда ей начать свое грязное дело.
Путем долгих манипуляций и экспериментов выяснилось, что оптимальнее всего смешать все это и поставить на определенный температурный режим, где каждый этап реакции будет происходить на своей заданной температуре. Этапа всего три: 1 Денатурация. При 95 градусах двойная спираль ДНК распадается на две нити разрушаются те самые слабые водородные связи между комплементарными нуклеотидами. При 40-60 градусах в зависимости от ряда факторов маленькие затравки находят комплементарный участок на одиночной цепи и садятся на него. При 72 градусах полимераза садится на затравку и начинает достраивать новую цепь, пользуясь старой как шаблоном. Откуда именно 72 градуса - очень интересная история о пользе фундаментальной науки, как-нибудь в другой раз.
В некоторых случаях выявляется необходимость дополнительных обследований.
Если количественный анализ на ПЦР выявляет сильное воспаление и фиброз, больному прописывают курс лечения противовирусными препаратами. В ситуациях, когда большое количество вирусных частиц сочетается с высоким показателем АЛТ, пациенту незамедлительно должно быть назначено лечение без проведения дополнительных диагностическим мероприятий. Качественно расшифровать показатели при количественном анализе крови на гепатит могут только квалифицированные и опытные специалисты, а современные технологии помогают сделать это при низкой концентрации вируса в крови. Читайте также: Анализы на гепатит C Качественный анализ ПЦР направлен на определение и подтверждение фактического присутствия вируса в организме. Его проводят при обнаружении в крови антител к гепатиту. Страдает не только печень, но и соседние органы Преимущества ПЦР При исследовании методом ПЦР и расшифровке анализа крови на гепатит можно также определить генотип возбудителя заболевания. Всего существует 6 генотипов вируса и большое количество субтипов, однако в нашем регионе распространение получили 1, 2 и 3 генотипы.
Другими преимуществами данного вида диагностики являются: высокая точность полученных показателей и низкая вероятность ошибки в них; высокий уровень чувствительности к вирусным частицам в крови; возможность выявления сразу нескольких возбудителей; диагностика болезнетворных внутриклеточных микроорганизмов, обладающих высокой антигенной изменчивостью; работа с расшифровкой анализа на гепатит позволяет обнаружить скрытые текущие инфекции. Кому назначают Анализ ПЦР на гепатит обязательно сдают следующие категории людей: беременные женщины; потенциальные доноры крови и органов; те, кто имеют характерные признаки заболевания; ВИЧ-инфицированные лица; лица, ведущие беспорядочную половую жизнь. Планируя ребенка, необходимо сделать анализ на гепатит Как проводится анализ и требуется ли к нему подготовка Забор крови для ПЦР-исследования производится из вены. Как правило, это происходит утром до того, как человек поел, поскольку после приема пищи должно пройти минимум 8 часов.
Что вам необходимо сделать
- Какой метод диагностики лучше?
- Анализы на ВПЧ. Что это такое и как его берут
- ПЦР на гепатит C: расшифровка количественного и качественного анализа, норма
- Чувствительность определения 60 МЕ/мл — что это значит? - Gepatit ABC
- ПЦР-тест и тест на антитела к коронавирусу: как разобраться в результатах?
Результаты ПЦР
Благодаря ферментативной реакции множественного копирования молекул генетического материала ПЦР обладает высокой чувствительностью. Для выявления и идентификации достаточно нескольких фрагментов ДНК возбудителей в исследуемом биологическом материале. Когда проводится анализ? ПЦР получила широкое распространение в различных областях практической медицины. Исследование является одним из основных методов диагностики различных инфекционных заболеваний с половым путем передачи.
И эти эксперименты завершились успешно [10].
Мюллис и его группа разработчиков подали заявку на патент, который утвердили 28 июля 1987 года. В том же 1985-м в Cetus начали использовать для ПЦР термостабильную Taq-полимеразу, что значительно упростило работу: раньше перед каждым новым синтетическим циклом в смесь надо было добавлять новую порцию фермента, потому что он быстро выходил из строя от высоких температур. Cycle рис. Рисунок 4. Cycle — первый прототип ПЦР-амплификатора.
Остальные члены его группы получили по символическому доллару. Это обострило и так напряженные отношения в коллективе. Осенью Мюллис покинул компанию [13]. После ухода из Cetus он два года возглавлял молекулярно-биологический отдел в Xytronyx, а в 1992-м открыл компанию по продаже ювелирных изделий с амплифицированной ДНК знаменитостей — Элвиса Пресли, Мэрилин Монро и т. Его награждение — до сих пор больной вопрос для норвежского научного сообщества, где первооткрывателем метода считают Хьелля Клеппе.
Сейчас Мюллису 72 года, он работает научным сотрудником Научно-исследовательского института детской больницы Окленда и с 2011 года возглавляет предприятие Altermune LLC, занимающееся изучением иммунитета [14]. Кэри Мюллис нередко выступает на конференциях, рассказывает о своей жизни, работе и, конечно, своем открытии см. Он — прекрасный рассказчик, его всегда интересно слушать. Видео 1. Однажды он рассказал о ночной встрече со светящимся зеленым енотом в лесу рядом со своим загородным домом.
В 1998 году вышла книга Кэри Мюллиса «Танец обнаженного разума» Dancing naked in the mind field , где в обрамлении автобиографических историй ученый высказывает своё мнение о глобальном потеплении, СПИДе и других волнующих общество вопросах. Мюллис верит в астрологию и считает, что значительного изменения климата не происходит, между ВИЧ и СПИДом нет никакой связи, а все исследования, говорящие об обратном, — плоды заговора ученых-карьеристов с правительствами их стран. Компания Cetus подала патентную заявку на метод ПЦР с Taq-полимеразой, и ее одобрили в октябре 1990 года. Журнал Science объявил Taq-полимеразу молекулой года, а статья сотрудников Cetus о ПЦР с ее использованием [15] несколько лет поддерживала статус самой цитируемой биологической публикации [16]. В августе химический гигант DuPont подал против Cetus иск, в котором утверждал, что патенты на ПЦР получены неправомерно, поскольку этот процесс еще в 1970-х описал Хьелль Клеппе.
Но через год объявило, что они останутся действительными: комиссия нашла метод, описанный в работе Клеппе, слишком «неопределенным и сомнительным». К тому же там не упоминалась возможность экспоненциальной репликации — отличительной черты ПЦР. В суде представители DuPont так и не смогли доказать вторичность изобретения Мюллиса. С этой сделки Cetus выплатила Кэри Мюллису неоправданно малую сумму, фактически ограбив его. Принцип метода Все мы знаем, что ДНК — это двухцепочечная молекула, где каждая цепочка состоит из звеньев-нуклеотидов.
Нуклеотиды составлены из трех молекул: остатка фосфорной кислоты, сахара и азотистого основания. Если сахар и фосфат одинаковы у всех нуклеотидов в ДНК в РНК сахар другой , то азотистых оснований четыре если не считать редкие модификации : аденин, тимин, цитозин и гуанин, обозначаемые А, Т, Ц и Г соответственно. В молекулах РНК тимин заменен урацилом. Нуклеотиды соединяются в цепочку, образуя связи между фосфатной группой одного нуклеотида и гидроксильной — другого. Чтобы молекула была стабильной, цепочки должны как-то взаимодействовать друг с другом.
Это обеспечивают водородные связи , образующиеся между азотистыми основаниями противоположных цепей по принципу комплементарности : А соединяется только с Т или У в РНК , а Г — с Ц рис. И поэтому, имея одну цепь ДНК, в соответствии с этим правилом легко построить ее пару. Собственно, на этом и основана ПЦР.
Применение различных способов и реактивов в разных лабораториях. Лучше проводить исследование в современной, хорошо себя зарекомендовавшей лаборатории. Для получения правильного результата важна чувствительность системы диагностики. Это нужно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой. Частота проведения количественного анализа Сдача анализов на гепатит с расшифровкой — надежный современный способ диагностики. Исследования проводятся до лечения, во время и после него, при наличии как острой, так и хронической форм заболевания.
Диагностика, проведенная до терапии, определяет его эффективность в дальнейшем. Традиционно исследование проводят перед назначением противовирусной терапии и через три месяца после лечения. Во время лечения забор крови делают на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Уже на 12-й неделе показатель виремии должен значительно снизиться.
Полимеразная цепная реакция ПЦР, PCR — метод молекулярной биологии, позволяющий создать копии определенного фрагмента ДНК из исходного образца, повысив его содержание в пробе на несколько порядков.
Изобретение ПЦР полностью и безвозвратно изменило медицину, науку и нашу жизнь в целом. Появилась возможность быстро и эффективно диагностировать наследственные заболевания и инфекции, определять личность преступников по одному волоску и свободно манипулировать генами. Не будь этого уникального метода, человечество вряд ли оказалось бы на пороге эпохи генной терапии. История метода Рисунок 1. История развития метода ПЦР.
Появился первый прототип ПЦР-циклера — Mr. Компания Cetus получила патент на метод ПЦР. Первое упоминание о ПЦР с обратной транскрипцией в журнале Science. Чтобы увидеть рисунок в полном размере, нажмите на него. Статьи с описанием работы он отправил в Journal of Biological Chemistry, где их отвергли...
Однако в 1958 году в журнале сменился главный редактор, и статьи наконец увидели свет [3]. А уже в 1959 году Артура Корнберга удостоили Нобелевской премии по физиологии и медицине. Норвежский биохимик Хьелль Клеппе рис. С 1968 по 1970 годы Клеппе работал постдоком в Университете Висконсина, в лаборатории Хара Гобинда Кораны — нобелевского лауреата 1968 года за расшифровку генетического кода. Именно в лаборатории знаменитого индийца чуть раньше разработали методики синтеза олигонуклеотидных праймеров — «затравок», необходимых для работы ДНК-полимеразы.
Рисунок 2. Хьелль Клеппе. Для завершения процесса репаративной репликации нужно будет добавить ДНК-полимеразу. В результате получатся уже две молекулы исходного дуплекса. Цикл можно повторять, каждый раз добавляя свежую порцию фермента».
К сожалению, эта гипотеза так гипотезой и осталась. Может, Клеппе даже и проводил какие-то эксперименты, но результаты не публиковал. Фредерик Сенгер , английский биохимик и лауреат Нобелевской премии 1958 года за работы по структуре белков [6] , предложил метод секвенирования ДНК, сейчас известный как метод Сенгера [7] , [8]. Этим он заработал еще одну нобелевскую медаль, в 1980-м, и стал единственным ученым в истории, получившим две «химических» премии [9]. Долгой трехчасовой дорогой он обдумывал отнюдь не проведение выходных, а предстоящий эксперимент по секвенированию ДНК.
И тут по словам Мюллиса его озарило: он ясно представил процесс амплификации преумножения генов, который позже получит название полимеразной цепной реакции. До работы в Cetus Кэри Мюллис изучал химию в Технологическом институте Джорджии, затем биохимию в Калифорнийском университете в Беркли, а после работал постдоком в Калифорнийском университете Сан-Франциско по направлению «фармацевтическая химия». В 1979 году его пригласили в Cetus синтезировать праймеры для секвенирования, а уже через два года Мюллис возглавил лабораторию синтеза ДНК и автоматизировал производство олигонуклеотидов [10]. Рисунок 3. Кэри Мюллис.
Чтобы проанализировать мутации, биологи проводили секвенирование по Сэнгеру, где используется один праймер для синтеза по одной из цепей ДНК. На серпантине по пути в Мендосино Мюллис предположил, что данные будут точнее, если использовать два праймера — для синтеза одновременно по двум цепям. Тогда можно будет сравнить получившиеся фрагменты и исключить неточности.